肉雞組織的熱應激損傷與Hsp90水平及其mRNA表達的變化.pdf

1、將100只1日齡的AA肉雞隨機分成五組，每組20羽.在正常的環(huán)境溫度下對受試雞進行30天的適應性飼養(yǎng)后，除對照組外，將其余80只受試雞的環(huán)境溫度迅速由(25±1)℃上升至(37±1)℃，并分別持續(xù)進行2、3、5和10 h的熱應激處理.對試驗到期的對照組和應激組肉雞進行剖殺，選取具有代表性的心臟、肝臟和腎臟三個組織，研究肉雞熱應激組織損傷與Hsp90及其mRNA表達的相關性.利用組織病理、免疫組織化學、酶聯(lián)免疫吸附試驗和實時熒光定量RT-

2、PCR方法檢測熱應激狀態(tài)下受試肉雞各組織的病理性損傷、Hsp90的定位、Hsp90和hsp90 mRNA的定量表達。 組織病理和免疫組織化學結果顯示，在熱應激開始的2-5 h期間，受試雞心臟、肝臟、腎臟、肺臟、脾臟及法氏囊組織的細胞損傷表現(xiàn)出隨著熱應激時間的持續(xù)而逐漸加重的趨勢，病理變化特征以顆粒變性、脂肪變性、充血和壞死為主.Hsp90陽性顆粒在各組織細胞的胞漿和胞核中均有分布，尤其是以胞核內分布較為明顯.并且在組織細胞相對完

3、整的部位Hsp90陽性信號明顯強于其他部位，另外，在受試雞心肌間質的小動脈管壁和血管內皮細胞、肝細胞竇狀隙及中央靜脈內皮細胞、腎小球毛細血管上皮細胞、腎小管間質小動脈管壁和血管內皮細胞、肺動脈管壁及其血管內皮細胞、脾臟中央動脈管壁及其內皮細胞均可見Hsp90的強陽性表達。 ELISA和FQ RT-PCR檢測結果顯示，與對照組相比，熱應激2 h后，Hsp90在肉雞心臟、肝臟、腎臟組織中的表達量呈極顯著增加(p<0.01)，而在應

4、激持續(xù)到3-5 h時呈現(xiàn)下降趨勢但差異不顯著，待熱應激持續(xù)至10 h后，心臟(P<0.01)和腎臟(P<0.05)組織中的Hsp90含量叉逐漸回升，肝臟組織中的Hsp90含量則仍然下降，但差異不顯著(p>0.05).熱應激過程中肉雞的心臟、肝臟及腎臟中hsp90 mRNA的含量的變化與心臟和腎臟中Hsp90的表達變化比較一致.即：熱應激初期hsp90 mRNA的水平和Hsp90的含量有所上升，到應激3h和5h時，又呈現(xiàn)一致下降，隨著應激

5、時間的延長，到應激10 h時，hsp90 mRNA的水平與Hsp90的表達又開始出現(xiàn)回升趨勢。 由以上結果可以得出結論：熱應激狀態(tài)下肉雞組織細胞的應激性病理損傷與Hsp90的分布和含量存在一定程度的關聯(lián)，在Hsp90陽性信號比較強的區(qū)域組織細胞相對比較完整，我們可以推斷Hsp90能夠發(fā)揮細胞保護作用.在所有被檢組織的血管內皮細胞和小動脈管壁均可見Hsp90的強陽性表達，提示這些組織中的血管功能活動與Hsp90密切相關，血管內皮細