重組人白細(xì)胞介素12雙亞基融合基因在樹突狀細(xì)胞表達(dá)的初步研究.pdf_第1頁(yè)
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1、該研究首先構(gòu)建了含有p40和p35 cDNA序列的IL-12融合基因,方法為去掉p40基因的終止密碼子和p35基因信號(hào)肽序列,再用一個(gè)疏水性多肽接頭（甘氨酸<,4>絲氨酸）<,3>DNA序列把兩個(gè)亞基相連接.IL-12融合基因共編碼540個(gè)氨基酸（aa）,包括信號(hào)肽（22aa）、p40成熟肽（306aa）、接頭（15aa）和p35成熟肽（197aa）.對(duì)該蛋白進(jìn)行構(gòu)象預(yù)測(cè),其構(gòu)象與IL-12的天然構(gòu)象相似.將IL-12融合基因克隆入真核

2、載體pcDNA3.1(+),獲得IL-12-pcDNA3.1（+）質(zhì)粒.然后,用rhGM-CSF和rhTNFα體外誘導(dǎo)臍帶血DC,通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將IL-12-pcDNA3.1（+）質(zhì)粒轉(zhuǎn)染DC細(xì)胞.最后,提取被轉(zhuǎn)染DC的總DNA和RNA,以IL-12的特異引物進(jìn)行PCR和RT-PCR擴(kuò)增,均可擴(kuò)增出1.63kb左右的特異條帶,表明IL-12-pcDNA3.1（+）質(zhì)粒已被成功地轉(zhuǎn)入DC,并且有mRNA水平的表達(dá).該研究結(jié)果為DC作為腫

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