乳黃片對(duì)A型肝性腦病大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)與蛋白的影響.pdf

1、湖北中醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文乳黃片對(duì)A型肝性腦病大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)與蛋白的影響姓名：陳軍梅申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：中醫(yī)內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：張赤志20050401湖北中醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文乳黃片對(duì)A型肝性腦病大鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)與蛋白的影響‘中文摘要目的A型肝性腦病(hepaticencephalopathyHE)是急性肝功能衰竭并發(fā)的大腦功能障礙，該病來(lái)勢(shì)兇險(xiǎn)，生存率僅為20%。目前，氨中毒學(xué)說(shuō)被公認(rèn)為仍處于HE眾多發(fā)病機(jī)制假說(shuō)的中心地位。通常

2、認(rèn)為它是通過(guò)干擾腦的能量代謝引起HE的發(fā)生。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者認(rèn)為，氨導(dǎo)致星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)功能失常，可能是HE發(fā)病的主要機(jī)理。祖國(guó)醫(yī)學(xué)稱本病為“肝厥”根據(jù)中醫(yī)理論與臨床經(jīng)驗(yàn)，導(dǎo)師張赤志教授認(rèn)為本病病因病機(jī)為邪毒直犯肝臟，肝失疏泄，脾失健運(yùn)，腸道傳導(dǎo)失司，腑濁內(nèi)生，化熱生痰，上擾神明:病位在肝、心腦與胃結(jié)合“肝與大腸相通，肝病宜疏通大腸”和“上病下治”治療原則，立通下解毒法選用酒制大黃和乳酸菌索組成乳黃片治療HE，臨床和前期動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均顯示

3、有很好的降氨作用，能明顯改善HE癥狀與體征，提高存活率。為進(jìn)一步明確乳黃片抗HE的作用位點(diǎn)與機(jī)制，本課題從動(dòng)物和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)兩方面研究該藥對(duì)星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)和蛋白表達(dá)的影響。方法(1)200士20g5PF級(jí)雄性Wistar大鼠96只，隨機(jī)分為6組，每組16只:正常對(duì)照組(A組)、模型組(B組)、乳果糖組(C組)、乳黃片小中大劑量組(DEF組)。大鼠禁食過(guò)夜(14h以上)，除A組外其余各組采用目前應(yīng)用最成熟的硫代乙酞胺(TAA)誘導(dǎo)法(TAA

4、250mgkg灌胃兩次，每次間隔24h)復(fù)制A型HE動(dòng)物模型。在TAA首次造模前2hAB組每只大鼠灌胃生理鹽水lmll00g體重，其余各組給等體積重量比的相應(yīng)藥物。以后每8h重復(fù)給藥一次。自首次TAA造模至實(shí)驗(yàn)結(jié)束，每隔8h皮下注射3m110%葡萄糖、2ml含等量生理鹽水與201imol1KC1溶液的混合液以防止低血糖。實(shí)驗(yàn)30h后行腦電圖(EEG)檢測(cè)，之后處置動(dòng)物取材。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，密切觀察大鼠行為學(xué)改變。(2)眼眶取血，檢測(cè)血清AL

5、T和血氨濃度。(3)伊文思藍(lán)(EB)滲出法檢測(cè)血腦屏障(BBB)通透性。透射電鏡觀察星形膠質(zhì)細(xì)胞在內(nèi)的BBB超微結(jié)構(gòu)變化。(4)小腦延髓池處抽取腦脊液，檢測(cè)腦脊液氨濃度。取大腦皮層組織，制成勻漿，高效液相色譜法檢測(cè)谷氨酞胺含量。取整個(gè)腦組織，千濕重法檢測(cè)腦組織含水量比。(5)免疫組織化學(xué)法觀察大腦皮層組織星形膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白一膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFA的的表達(dá)。(6)半定量逆轉(zhuǎn)錄一多聚酶鏈法(RTPCR)檢測(cè)大鼠皮層腦組織谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體GL

6、TImRNA的表達(dá)情況。(7)制備乳黃片腦脊液，作用暴露于5mM濃度氯化錢(qián)的星形膠質(zhì)細(xì)胞CRL254148hMTT法檢測(cè)其活性，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)GFAP表達(dá)情況。結(jié)果(1)乳黃片可明顯改善A型HE大鼠行為異常和EEG變化，顯著降低血清ALT與血氨水平(P0.01)，提高存活率大、中、小劑量組療效均優(yōu)于乳果糖組，且以中劑量組最佳(2)乳黃片能明顯降低A型HE大鼠腦組織EB含量(PO.01)，顯著改善星形膠質(zhì)細(xì)胞在內(nèi)的BBB超微結(jié)構(gòu)受損情