高壓氧對急性一氧化碳中毒大鼠遲發(fā)性腦病影響的研究.pdf

1、部分急性一氧化碳中毒(carbon monoxide poisoning，CO-P)患者在經(jīng)過一段時間表現(xiàn)正?；蚪咏５摹凹儆凇焙髸俅纬霈F(xiàn)神經(jīng)、精神病學方面的表現(xiàn)，發(fā)生急性CO-P遲發(fā)性腦病(delayed neurological sequelae，DNS)。臨床上高壓氧(hyperbaric oxygenation，HBO)對急性CO-P的治療作用眾所周知，但它對急性CO-PDNS是否有預防作用，作用多大，及HBO是否能有效治

2、療急性CO-PDNS，卻爭論不休。為了給臨床提供HBO對急性CO-PDNS預防及治療作用基礎(chǔ)研究方面的證據(jù)，我們在前期研究的基礎(chǔ)上，建立改良的急性CO-P動物模型(大鼠)，根據(jù)分組，對治療組進行HBO暴露后，在同一時間，同等條件下對各組大鼠進行神經(jīng)行為學檢測，根據(jù)神經(jīng)功能的變化，評價急性CO-P后DNS的發(fā)生情況；取動物腦組織進行形態(tài)學及免疫組化研究，評價HBO對組織細胞的保護作用。力圖從行為學、細胞及分子水平探討HBO對急性CO-PD

3、NS的發(fā)病情況等方面的影響，并分析其可能的影響機制；闡述HBO在預防和治療急性CO-PDNS中的重要作用，為臨床提供相關(guān)的科學依據(jù)，并為進一步研究奠定基礎(chǔ)。
　　 目的:探索建立能有效增加大鼠DNS發(fā)生率的急性CO-P模型，改進急性CO-PDNS是否發(fā)生的評估條件；觀察大鼠DNS的發(fā)病情況、病理形態(tài)學改變及髓鞘堿性蛋白(myelinbasicprotein，MBP)的表達情況，揭示HBO對急性CO-PDNS的影響，從而探討HBO

4、對急性CO-PDNS預防及治療的可能機制。
　　 方法:本研究采用腹腔注射純品CO氣體進行染毒的方法建立大鼠急性CO-P模型。雄性SD大鼠48只，體重400g左右，在Morris水迷宮基礎(chǔ)訓練篩選后，隨機分為正常對照組(NC組)、急性一氧化碳中毒組(CO-P組)、急性一氧化碳中毒高壓氧治療組(HBO組)，按120ml/kg腹腔注射純品CO氣體，隨后每隔4小時，按首劑量一半進行追加注射，共追加4次。動態(tài)監(jiān)測碳氧血紅蛋白(carbo

5、nylhemoglobin，COHB)含量，觀察大鼠神志行為改變。對HBO組大鼠進行HBO治療，在DNS發(fā)病潛伏期內(nèi)(2～21天)對各組大鼠進行神經(jīng)功能評估，采用Morris水迷宮測試，隔天進行一次，以連續(xù)2次逃逸潛伏期復升認定為發(fā)生DNS。于染毒后第21天取大鼠腦組織(海馬區(qū))制作石蠟組織切片，進行常規(guī)HE染色，觀察其組織形態(tài)學變化；利用免疫組化技術(shù)(immunohistochemistry，IHC)檢測海馬區(qū)MBP含量；利用蛋白免疫

6、印跡(Western Blotting，WB)檢測各組大鼠腦組織中MBP的表達情況，ImageJ圖像分析軟件分析結(jié)果；將以上檢測結(jié)果進行組間比較，統(tǒng)計學分析。
　　 結(jié)果:
　　 1、大鼠急性CO-P模型的建立：分次腹腔注射純品CO氣體后，大鼠均在15min內(nèi)出現(xiàn)不同程度的腦損傷：有躁動不安，呼吸急促、撞籠，痙攣、四肢癱軟等表現(xiàn)。碳氧血紅蛋白檢測：COHB％>50％，持續(xù)16小時以上。
　　 2、Morris水迷

7、宮檢測：CO-P組大鼠在第7天、第14天、第21天統(tǒng)計DNS的發(fā)生例數(shù)分別為：3例(第1-7天內(nèi))、5例(第8-14天內(nèi))和1例(第15-21天內(nèi))；同時段內(nèi)HBO組DNS的發(fā)生例數(shù)分別是：2例、2例和0例。至染毒后第21天HBO組DNS的發(fā)病率明顯低于CO-P組(P<0.05)；對已發(fā)生DNS的大鼠，通過將其復升后平均成績與該只大鼠21天的平均成績之差比較，結(jié)果表明：HBO組大鼠學習記憶能力高于CO-P組(P<0.05)。
　　

8、 3、Western Blotting分析結(jié)果表明CO-P組大鼠腦組織MBP水平明顯低于HBO組(P<0.05)；以上兩組大鼠腦組織MBP水平均低于NC組(P<0.05)。
　　 4、HE染色觀察大鼠海馬組織可見，CO-P組和HBO組均有不同程度的神經(jīng)細胞變性壞死，表現(xiàn)為細胞排列雜亂，胞體縮小，胞核深染。CO-P組細胞損傷程度較HBO組嚴重。
　　 5、IHC染色結(jié)果觀察發(fā)現(xiàn)，腦組織海馬區(qū)MBP平均累計光密度值(IOD