母體能量水平對梅山和約克夏胎豬及生后卵巢發(fā)育的影響.pdf

1、卵巢發(fā)育與母豬的繁殖年限密切相關，適當的飼糧能量水平調控卵泡健康發(fā)育是保證母豬適時發(fā)情、受胎、并提高產仔數的基礎。原始卵泡作為卵巢發(fā)育的起點，在胎兒期已形成。為弄清胎兒期具有時間依賴性的功能蛋白對卵巢發(fā)育的作用及母體能量水平對胎豬卵巢發(fā)育的影響，本研究比較了梅山豬和約克夏豬胎兒卵巢發(fā)育以及其對母體飼糧能量水平敏感性的差異，并在此基礎上進一步研究了母體能量水平對后代（生前、生后）卵巢健康發(fā)育的影響，本研究包括以下三部分:
　　試驗一

2、 梅山和約克夏胎豬卵巢發(fā)育的差異研究
　　本試驗旨在比較梅山豬和約克夏豬胎兒卵巢發(fā)育過程中調控原始卵泡形成和轉化為次級卵泡時的關鍵蛋白表達。試驗分別選取日齡、體重相近的純種梅山（72.58±0.73kg）和約克夏（135.73±0.54kg）初產母豬各8頭，分別用同一頭純種梅山和約克夏公豬精液人工授精，配種后分別參照中國豬飼養(yǎng)標準(2004)和NRC(2012)配制梅山和約克夏母豬妊娠期飼糧。妊娠0-30天，每頭母豬每天飼喂2kg

3、;31-90天，每天飼喂2.4kg。妊娠第55天每個品種隨機選擇4頭母豬深度麻醉后屠宰，剩余母豬于妊娠第90天屠宰，收集雌性胎豬卵巢，利用雙向熒光差異凝膠電泳結合質譜分析的方法考察兩個品種卵巢蛋白表達差異。結果顯示:
　　1.電泳結果:1）妊娠第55天，兩個品種胎兒卵巢有1551個差異蛋白點，約克夏較梅山胎豬卵巢共計14個蛋白上調，13個蛋白下調（約克夏/梅山＞1.6，梅山/約克夏＞1.6，P＜0.05蛋白點27個）。2）妊娠第9

4、0天，兩個品種胎兒卵巢中存在1400個差異蛋白點，約克夏較梅山胎豬卵巢共計7個蛋白上調，9個蛋白下調（約克夏/梅山＞1.6，梅山/約克夏＞1.6，P＜0.05蛋白點16個）。
　　2.質譜分析結果:1）妊娠第55天，約克夏胎豬卵巢表達上調蛋白主要參與原始卵泡組裝，如肌動蛋白、抗胰蛋白酶、波形蛋白;梅山胎豬卵巢表達上調蛋白為原始卵泡形成前的相關蛋白，如絲氨酸/蘇氨酸蛋白質磷酸酶2調節(jié)亞基1β、絲氨酸/蘇氨酸蛋白質磷酸酶2調節(jié)亞基1α

5、等。2）妊娠第90天，約克夏胎豬卵巢表達上調的蛋白主要參與應激反應，如熱休克蛋白;梅山胎豬卵巢表達上調蛋白為調節(jié)原始卵泡向初級卵泡轉化相關的蛋白，如甲胎蛋白、轉鐵蛋白等。
　　以上結果表明:梅山和約克夏胎豬卵巢發(fā)育過程中，梅山豬卵巢原始卵泡形成時間較晚，但是梅山胎豬于原始卵泡向初級卵泡轉化階段卵巢發(fā)育潛能優(yōu)于約克夏豬。
　　試驗二 母體能量水平對不同品種胎豬卵巢發(fā)育的影響
　　本試驗旨在考察母體能量水平對約克夏豬和梅山

6、豬胎兒卵巢發(fā)育的影響。試驗選取日齡、體重相近的純種約克夏（135.54±0.66kg）和梅山（72.84±0.66kg）初產母豬各16頭，分別用同一頭純種約克夏和梅山公豬精液人工授精，配種后約克夏母豬分別飼喂能量水平為3.4Mcal/kg、3.0Mcal/kg飼糧;梅山母豬飼喂能量水平為3.0Mcal/kg、2.6Mcal/kg飼糧，飼喂量及飼喂方式同試驗一。妊娠第55，90天時，每組隨機選擇4頭母豬深度麻醉后屠宰，收集雌性胎豬卵巢，首

7、先通過蛋白組學技術，測定約克夏3.0Mcal/kg組以及梅山2.6Mcal/kg組卵巢樣品，進而分析同一品種不同時間點卵巢發(fā)育差異蛋白，明確不同時間點特征性蛋白表達規(guī)律，并進一步考察能量水平對特征蛋白mRNA表達的影響。結果顯示:
　　1.蛋白組學分析結果:1）約克夏豬妊娠第55天與妊娠第90天相比胎兒卵巢有1551個差異蛋白點，其中25個蛋白上調，18個蛋白下調(55d/90d＞1.6，90d/55d＞1.6，P＜0.05的蛋白

8、點43個);質譜分析結果顯示妊娠55天約克夏胎豬卵巢上調的蛋白主要有甲胎蛋白、抗胰蛋白酶、波形蛋白等，妊娠90天高表達的主要為凝溶膠蛋白、78葡萄糖調節(jié)蛋白等。2）梅山豬妊娠第55天與妊娠第90天相比胎兒卵巢有1740個差異蛋白點，其中15個蛋白上調，12個蛋白下調（55d/90d＞1.6，90d/55d＞1.6，P＜0.05的蛋白點27個）;質譜分析結果顯示妊娠55天梅山胎豬卵巢顯著上調的蛋白主要包括甲胎蛋白、肽脯氨酰順反異構酶等;妊

9、娠90天胎豬顯著上調的蛋白主要為抗胰蛋白酶、凝溶膠蛋白等。2.基因表達
　　結果:1)與低能量水平組相比，約克夏豬妊娠期母體飼喂高能量水平飼糧，顯著降低了妊娠55天胎兒卵巢中調控原始卵泡形成的關鍵蛋白抗胰蛋白酶、甲胎蛋白mRNA的表達量(P＜0.05)，同時也降低了妊娠90天胎兒卵巢中調控細胞抗應激能力的關鍵蛋白78葡萄糖調節(jié)蛋白以及調控原始卵泡向初級卵泡轉化的重要蛋白凝溶膠蛋白mRNA的表達量（P＜0.05）。2）妊娠55天，母

10、體飼喂不同能量水平飼糧對梅山胎豬卵巢原始卵泡形成的關鍵蛋白如抗胰蛋白酶、甲胎蛋白等的表達量無顯著影響，而且妊娠90天母體飼喂不同能量水平飼糧對梅山胎豬卵巢中調控原始卵泡向初級卵泡轉化的凝溶膠蛋白以及參與機體炎癥反應的關鍵蛋白肽脯氨酰順反異構酶的表達量也無顯著影響。
　　本試驗結果表明:母體高能量水平通過影響調控原始卵泡形成、原始卵泡向初級卵泡轉化以及細胞抗應激能力等基因的表達，不利于約克夏胎豬卵巢發(fā)育;母體攝入不同能量水平飼糧不影

11、響梅山豬胎兒卵巢發(fā)育。
　　試驗三 母體妊娠期飼糧能量水平對后代卵巢健康的影響
　　本試驗旨在考察母體能量水平對約克夏豬后代卵巢發(fā)育過程中氧化應激、卵泡發(fā)育的影響。24頭約克夏妊娠母豬高、低能量水平飼喂，前期處理（妊娠0-90天）與試驗二相同，妊娠第90天屠宰后，各處理組余下4頭母豬飼喂至分娩，每天飼喂3kg。泌乳期均采食相同飼糧，仔豬斷奶后每窩選擇6頭雌性仔豬，按豬場后備母豬常規(guī)飼養(yǎng)管理方式飼養(yǎng)。母豬妊娠第55天、90天每

12、組隨機選擇4頭母豬屠宰并分別收集胎兒卵巢，子代母豬160天和初情時，每窩均選擇平均體重的1頭母豬屠宰并分別收集子代母豬卵巢樣品，測定相關指標。結果顯示:
　　1.母體妊娠期高能量水平降低子代160天時大卵泡數目、肝臟重量以及初情階段小卵泡數目(P＜0.05)。2.與妊娠期低能量水平組相比，母體高能量水平提高了妊娠90天胎豬卵巢丙二醛含量（P＜0.05），降低了總超氧化物歧化酶(P＜0.01)、CuZn-超氧化物歧化酶(P＜0.05

13、)、谷胱甘肽還原酶(P=0.05)、谷胱甘肽過氧化物酶(P＜0.05)以及總抗氧化能力(P＜0.05)的酶活;妊娠期母體高能量水平降低子代后備母豬160天階段時卵巢中總超氧化物歧化酶活力（P＜0.05）、谷胱甘肽過氧化物酶(P＜0.05)以及總抗氧化能力(P＜0.05)。3.母體妊娠期高能量水平導致妊娠90天胎豬卵巢中B細胞淋巴瘤因子2(B-celllymphoma-2，BCL2)等促凋亡相關因子mRNA相對表達量高于低能組(P＜0.0

14、5)，程序性死亡調節(jié)因子(Bcl-2 Assaciated X protein，BAX)等凋亡抑制因子低于低能組(P＜0.05)。后備母豬160天時BAX的mRNA相對表達量低能組高于高能組(P＜0.05)，同時，BCL2的mRNA相對表達量在160天和初情時低能組均低于高能組（P＜0.05）。
　　本試驗結果表明:妊娠期母體攝入高能量水平飼糧加劇了子代卵巢氧化應激和細胞凋亡，降低卵泡數目，不利于后代卵巢健康。
　　綜上所述