缺血預(yù)處理對脊髓缺血再灌注損傷保護作用機制的基礎(chǔ)研究.pdf

1、目的： 研究缺血預(yù)處理(ischemic preconditioning，IPC)對缺血再灌注損傷過程中細胞凋亡信號調(diào)節(jié)激酶-1(apoptosis signal-regulatingkinase 1，ASK 1)-絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)的脊髓神經(jīng)細胞凋亡的影響，并進一步探討缺血預(yù)處理通過調(diào)節(jié)ASKl和14-3-3的關(guān)系從而保護神經(jīng)細胞的分

2、子生物學(xué)機制。 方法： 健康成年新西蘭大白兔隨機分為空白組(n=5)、缺血再灌注(ischemia reperfusion,IR)組(n=15)、缺血預(yù)處理(ischemicpreconditioning，IPC)組(n=15)，利用左腎動脈以下腹主動脈阻斷法制作脊髓缺血預(yù)處理模型和脊髓缺血再灌注損傷模型：空白組實驗動物僅麻醉后腹腔切開，無其它特殊處理；IR組實驗動物夾閉腹主動脈30min后松開腹主動脈分別再灌注至30m

3、in、2h、8h，IPC組先予重復(fù)三次短暫缺血5mi/再灌注5min預(yù)處理后夾閉腹主動脈30rain，后松開腹主動脈分別再灌注至30min、2h、8h。背部切口取出L4節(jié)段以下脊髓組織。HE染色、電鏡檢測脊髓神經(jīng)細胞形態(tài)學(xué)變化；Westem-blot檢測脊髓組織中ASKl、c-Jun氨基末端激酶(c-JunN-terminal hnaSe，JNK)、p38蛋白的表達與活化；免疫共沉淀(immoprecipitation，IP)檢測分析A

4、SKl與14-3-3蛋白間的結(jié)合與分離。 結(jié)果： 形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果顯示：IPC組和再灌注相同時段IR組相比脊髓神經(jīng)細胞凋亡程度、間質(zhì)出血程度明顯減輕。 Westernblot結(jié)果顯示：IPC組和再灌注相同時段IR組相比ASK1、JNK、p38蛋白表達程度無明顯變化，但活化程度明顯降低。 免疫共沉淀結(jié)果顯示：IPC組和再灌注相同時段IP組相比ASK1扣14-3-3蛋白解離程度明顯被抑制。 結(jié)論：