在低氧條件下siRNA干擾HIF-2α對(duì)前列腺癌PC-3細(xì)胞增殖及凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　1.在培養(yǎng)基中加入氯化鈷(CoCl2)模擬缺氧環(huán)境培養(yǎng)細(xì)胞,以觀察低氧條件下缺氧誘導(dǎo)因子-2α(Hypoxia inducible factor-2α,HIF-2α)在人前列腺癌細(xì)胞PC-3中的表達(dá)。
　　2.利用CoCl2建立的低氧模型,觀察HIF-2α干擾對(duì)前列腺癌細(xì)胞PC-3中HIF-2α表達(dá)及其增殖和凋亡的影響。
　　方法:
　　1.在培養(yǎng)基中加入CoCl2模擬缺氧,用MTT法檢測(cè)CoCl2對(duì)

2、PC-3細(xì)胞的抑制情況;采用反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)檢測(cè)CoCl2與HIF-2α的mRNA轉(zhuǎn)錄的量-效和時(shí)-效關(guān)系,從而為腫瘤細(xì)胞的缺氧模型選擇一個(gè)最佳的作用濃度和最佳的作用時(shí)間。
　　2.將實(shí)驗(yàn)分成常氧組、低氧組、低氧+脂質(zhì)體組、低氧+HIF-2αsiRNA組,用RT-PCR方法檢測(cè)48h各組中HIF-2α的mRNA水平;蛋白印跡實(shí)驗(yàn)(Western blotting)檢測(cè)前列腺癌細(xì)胞PC-3中HIF-2α蛋白的表達(dá);MTT

3、法檢測(cè)沉默HIF-2α基因?qū)?xì)胞生長(zhǎng)的影響;利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的凋亡。
　　結(jié)果:
　　1.100μmol/LCoCl2作用48h可作為最佳前列腺癌細(xì)胞PC-3缺氧模型。
　　2.各實(shí)驗(yàn)組都存在HIF-2α的mRNA轉(zhuǎn)錄和蛋白的表達(dá),加CoCl2組HIF-2αmRNA水平和蛋白質(zhì)水平較常氧組顯著增高(P<0.05);低氧+HIF-2αsiRNA組,HIF-2αmRNA水平和蛋白水平較低氧和低氧+空脂質(zhì)體組顯著降低(

4、P<0.05);低氧+空脂質(zhì)體組較低氧組HIF-2αmRNA水平和蛋白水平無(wú)顯著增高(P>0.05);加CoCl2組較常氧組細(xì)胞增殖活力和凋亡無(wú)明顯差異(P>0.05);低氧+HIF-2αsiRNA組細(xì)胞的增殖活力降低凋亡增加較低氧組、低氧+空脂質(zhì)體組(P<0.05);低氧與低氧+空脂質(zhì)體組細(xì)胞的增殖和凋亡無(wú)明顯差異(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.CoCl2可誘導(dǎo)前列腺癌PC-3細(xì)胞缺氧使HIF-2α的mRNA高表達(dá)