特布他林對A549細胞吞噬凋亡嗜酸性粒細胞及分泌IL-6和IL-8的影響.pdf

1、嗜酸粒性細胞是支氣管哮喘發(fā)病機制中的主要效應(yīng)細胞，與哮喘氣道炎癥、氣道重塑及氣道高反應(yīng)性有關(guān)，因而清除嗜酸粒性細胞對哮喘炎癥的控制起著重要作用。研究表明肺部嗜酸粒性細胞可通過凋亡后被巨噬細胞或氣道上皮細胞吞噬而被清除，由于它們是被完整地吞噬和清除，從而防止細胞內(nèi)炎性介質(zhì)和毒性內(nèi)容物的泄漏，對哮喘炎癥的控制具有重要意義。 β2-受體激動劑是治療支氣管哮喘的有效藥物，近年來研究表明β2-受體激動劑除具有舒張支氣管的作用外，還有一定的

2、抗炎作用，但具體機制不明。 已有文獻報道地塞米松可以上調(diào)上皮細胞吞噬凋亡嗜酸粒性細胞的能力，并存在濃度依賴效應(yīng)，而一些升高細胞內(nèi)cAMP水平的藥物也可以促進細胞吞噬。對同為治療支氣管哮喘有效的藥物，β2-受體激動劑是否可以對上皮細胞吞噬凋亡嗜酸粒性細胞產(chǎn)生作用還不清楚。雖然已有文獻報道β2-受體激動劑可以抑制一些炎性因子的分泌，但β2-受體激動劑對上皮細胞吞噬凋亡的嗜酸粒性細胞的干預(yù)作用是否與抑制炎性因子的分泌相關(guān)還未見報道。研

3、究特布他林對上皮細胞吞噬凋亡嗜酸粒性細胞的作用及對IL-6、IL-8分泌的影響，目的是進一步探討β2-受體激動劑在治療支氣管哮喘中的作用機制。 目的： 1)探討特布他林對A549細胞吞噬凋亡嗜酸粒性細胞的作用，并了解有無濃度和時間依賴的關(guān)系。 2)觀察A549細胞吞噬凋亡嗜酸粒性細胞后釋放IL-6、IL-8的變化情況。 3)探討特布他林對脂多糖刺激的A549細胞分泌IL-6、IL-8有無抑制作用，是否存在

4、濃度依賴關(guān)系。 方法： 用磁細胞分離柱和CD15、CD16免疫磁珠抗體分離正常人外周靜脈血中的嗜酸粒性細胞，培養(yǎng)48小時后通過形態(tài)學(xué)和AnnexinV-FITC凋亡試劑盒進行嗜酸粒性細胞凋亡鑒定。凋亡嗜酸粒性細胞與不同時間、濃度特布他林干預(yù)的A549細胞共培養(yǎng)l小時，培養(yǎng)結(jié)束后凋亡嗜酸粒性細胞用鄰聯(lián)茴香胺進行過氧化物酶染色，A549細胞用蘇木素加以核襯染。Olympus倒置顯微鏡及DiagnosticInstrument

5、s-Spot insight數(shù)字圖象采集攝像系統(tǒng)動態(tài)觀察吞噬現(xiàn)象，光鏡下進行吞噬率統(tǒng)計。A549細胞分別與凋亡嗜酸粒性細胞、脂多糖、脂多糖和不同濃度特布他林共培養(yǎng)，放射免疫法檢測上清液IL-6、IL-8的濃度。 結(jié)果： 1)A549細胞分別被特布他林干預(yù)1、2、3小時后，其吞噬能力隨時間延長而下降。 2)A549細胞在特布他林以10μmol/L幾濃度干預(yù)時吞噬能力最低，且吞噬能力隨著濃度的降低而升高，但以0.1

6、μmol/L濃度干預(yù)時無顯著的抑制作用。 3)吞噬凋亡嗜酸粒性細胞的A549細胞與未吞噬的A549細胞比較，IL-6和IL-8的分泌沒有顯著差異，但脂多糖顯著刺激A549細胞分泌IL-6和IL-8。 4)特布他林抑制脂多糖誘導(dǎo)的A549細胞分泌IL-6、IL-8，且存在濃度依賴關(guān)系。 結(jié)論： 1)特布他林以時間、濃度依賴的方式抑制A549細胞吞噬凋亡的嗜酸粒性細胞。 2)特布他林通過抑制炎性狀態(tài)下