Ming氏膨脹型胃癌細胞系的建立.pdf

1、目的: 建立Ming氏膨脹型胃癌細胞系，探討其生物學特性，為利用Ming氏分型研究胃癌的發(fā)生機理提供一個實驗模型。
　　 方法: 通過混合酶消化法進行胃癌原代培養(yǎng)進而建立細胞系。通過細胞形態(tài)學觀察、細胞免疫組織化學染色、細胞倍增時間測定、核型分析、瓊脂糖集落形成實驗、平板克隆實驗、免疫缺陷小鼠體內(nèi)成瘤實驗揭示其生物學特性。
　　 結果: 原代培養(yǎng)經(jīng)純化傳代成功建立一個Ming氏膨脹型胃癌細胞系。顯微鏡下細胞呈上皮樣，單層

2、貼壁生長，有重疊生長現(xiàn)象。除處于有絲分裂階段和衰老退變的細胞外，以梭形細胞、多邊形細胞為主。細胞HE染色見胞漿輕度嗜堿，核大、明顯，核仁清晰可見，核漿比例增大，可見多核巨細胞。細胞倍增時間(PDT)為60 h。軟瓊脂細胞集落形成率約為45.8％;平板克隆形成率約等于8.13％。細胞免疫組織化學染色顯示:細胞Ⅳ型膠原表達陽性，胞漿內(nèi)均勻染色;角蛋白染色呈強弱不同的陽性表達，胞漿均勻淡染;質(zhì)子泵染色顯示大部分胞漿及胞膜彌漫深染，呈強陽性表達

3、;胞漿層粘連蛋白均勻深染，呈強陽性表達;Ki-67染色顯示細胞核呈褐色，胞漿及胞膜未著色，200倍鏡下隨機取5個視野計數(shù)平均染色率約為80.6％; CEA染色顯示胞漿內(nèi)彌漫著色，染色較深，呈強陽性表達;波形蛋白染色見胞漿均勻著色，提示表達陽性;E-鈣蛋白染色胞漿內(nèi)染色較淡，呈弱陽性表達。細胞染色體眾數(shù)介于23～137條之間。三倍體及亞三倍體細胞(46＜染色體數(shù)≤69)占86％，為穩(wěn)定的亞三倍體細胞系。裸鼠異體接種全部成瘤。