Rab23通過Hedgehog信號通路抑制乳腺癌細(xì)胞生長和增殖.pdf

1、【背景】
　　乳腺癌是一種女性常發(fā)惡性腫瘤，我們的前期工作及國內(nèi)外的相關(guān)報道均證實，乳腺癌的發(fā)生與Hedgehog信號通路的過度激活有著密切的聯(lián)系。Rab23是2001年發(fā)現(xiàn)的一個新的Hedgehog信號通路負(fù)調(diào)節(jié)分子，研究表明Rab23可能是位于細(xì)胞跨膜蛋白SMO和轉(zhuǎn)錄因子Gli傳導(dǎo)通路之間的負(fù)性調(diào)節(jié)信號分子，抑制通路信號向Gli的傳遞。本研究首次闡明了Rab23分子在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)及通過Hedgehog信號通路對乳腺癌細(xì)胞

2、生長增殖的抑制作用，而且這種抑制作用與乳腺癌ER+/ER-可能無相關(guān)性，進(jìn)一步豐富了乳腺癌的發(fā)病機(jī)理的研究，為臨床治療乳腺癌提供了一條新思路。
　　【目的】
　　明確Rab23分子在不同類型的乳腺癌細(xì)胞中是否表達(dá)及表達(dá)量情況，探討Rab23分子對乳腺癌細(xì)胞生長增殖的作用及機(jī)制，討論Rab23對Hedgehog信號通路的具體作用。
　　【方法】
　　1.運用RT-PCR和免疫熒光化學(xué)技術(shù)檢測Rab23分子在乳腺癌細(xì)

3、胞系和正常乳腺細(xì)胞中的表達(dá)。
　　2.運用質(zhì)粒轉(zhuǎn)染和RNAi技術(shù)分別提高和降低Rab23分子在三種乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)。
　　3.運用克隆形成試驗和MTT試驗檢測Rab23對乳腺癌細(xì)胞生長的影響。
　　4.運用BrdU摻入試驗檢測Rab23對乳腺癌細(xì)胞DNA合成的影響。
　　5.運用流式細(xì)胞技術(shù)檢測Rab23對乳腺癌細(xì)胞凋亡的影響。
　　6.運用RT-PCR技術(shù)檢測Rab23對Hedgehog信號通路中的Gl

4、i1、Gli2的作用。
　　【結(jié)果】
　　1.RT-PCR結(jié)果顯示在正常乳腺細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞系中均有Rab23mRNA的表達(dá)，且在MCF-7細(xì)胞中表達(dá)量最少，其次為HBL-100細(xì)胞，表達(dá)量最多的是MDA-MB-231和Bcap-37（P＜0.05），后兩者比較無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。
　　2.免疫熒光染色提示Rab23分子主要分布在乳腺癌細(xì)胞胞核周圍的胞質(zhì)中。
　　3.克隆形成實驗提示，上調(diào)Rab23可顯

5、著減少乳腺癌細(xì)胞系集落形成數(shù)量，上調(diào)Gli1其集落形成數(shù)量明顯增加。
　　4.BrdU摻入實驗提示，上調(diào)Rab23可顯著減少乳腺癌細(xì)胞的DNA合成，而下調(diào)Rab23可顯著提高乳腺癌細(xì)胞的DNA合成。
　　5.MTT實驗顯示，上調(diào)Rab23可顯著抑制乳腺癌細(xì)胞生長，而下調(diào)Rab23可顯著促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞生長。
　　6.流式細(xì)胞術(shù)顯示上調(diào)Rab23可增加乳腺癌細(xì)胞凋亡。
　　7.RT-PCR結(jié)果顯示，上調(diào)Rab23可顯