大豆磷高效轉錄因子GmPHR1功能驗證與GmPHR1-GmPAP4雙基因轉化.pdf

1、磷對大豆生長發(fā)育至關重要，土壤有效磷缺乏嚴重影響大豆產量品質。發(fā)掘利用磷高效基因并選育轉基因新品種是解決上述問題最經濟有效途徑。本研究在課題組前期已克隆轉錄因子GmPHR1，并證實其在轉基因擬南芥中具有提高磷素利用效率基礎上，利用獲得的轉GmPHR1大豆新種質，研究其在轉基因大豆中的生物學功能;同時通過農桿菌介導及常規(guī)雜交技術實現(xiàn)GmPHR1與其它磷高效基因共轉化，并探索轉基因大豆選擇標記去除技術。主要結果如下:
　　1.通過PC

2、R擴增、DNA測序及Southern blot發(fā)現(xiàn)目的基因在轉基因大豆株系中穩(wěn)定整合，通過實時定量PCR和Western blot分析獲得了GmPHR1高效表達轉基因株系。
　　2.低磷脅迫處理下，分析不同大豆轉基因株系磷素利用效率及產量相關性狀發(fā)現(xiàn)，2個ZH41-PHR1株系與4個JD12-PHR1株系葉片磷含量、MDA與H2O2含量、花青素含量與凈光合速率等磷素利用效率相關性狀顯著優(yōu)于野生型對照，且低磷條件下的單株莢數(shù)、單株粒

3、數(shù)和粒重等產量性狀也較野生型對照顯著增加。
　　3.通過農桿菌介導轉化技術實現(xiàn)了GmPHR1與GmPAP4雙基因共轉化，獲得了轉雙基因大豆新種質JD12-PAP4-PHR1;同時利用常規(guī)雜交技術也實現(xiàn)了GmPHR1與GmPAP4雙基因共轉化，獲得了轉有GmPHR1與GmPAP4雙基因新種質JD12-AP4-PHR1。
　　4.探明了利用β-雌二醇化學誘導法刪除轉基因大豆LoxP位點間選擇標記基因的可行性，利用Cre過表達法刪