Wnt-β-catenin信號通路與胰腺癌吉西他濱耐藥關系的初步研究.pdf

1、1背景和目的
　　 胰腺癌是最常見的惡性腫瘤之一，在美國與癌癥相關的死亡原因位居第位四。早期胰腺癌患者通常采用手術治療、輔助化療或放療，或聯(lián)合治療。手術切除是治療胰腺癌的唯一機會，但是，只有不到20％的胰腺癌患者適合手術治療，因為胰腺癌通常在發(fā)現(xiàn)時已處于進展期。吉西他濱是目前治療胰腺癌的一線藥物，治療局部進展期胰腺癌時單藥有效率僅為17.3％，無進展生存期為3.7個月；聯(lián)合奧沙利鉑的有效率為26.8％，無進展生存期為5.8個月。

2、吉西他濱耐藥可以是原發(fā)的或繼發(fā)的，這是在化療失敗的最可能的原因之一。吉西他濱有一個復雜的代謝途徑，很多機制均可以促進吉西他濱的細胞毒性和/或化療耐藥。Wnt信號通路已被報告將在癌癥發(fā)展和耐藥參與了白血病和肝癌。迄今為止，關于與Wnt信號和吉西他濱耐藥性的關系研究很少。在此研究的第一和第二部分中，我們研究了典型信號通路之間的Wnt和吉西他濱耐藥的相關性。在第三部分，我們使用流式細胞儀檢測了胰腺癌細胞株相關干預前后腫瘤干細胞表面標志的比例分

3、布。
　　 2主要試劑
　　 吉西他濱（200mg/支），Wnt3a和Dkk-1（10μg，R&D）
　　 3統(tǒng)計學分析
　　 報告基因和MTT結果兩兩組間比較采用單因素方差，后續(xù)檢驗采用q檢驗。相關性檢驗使用Pearson檢驗。當p<0.05時認為有統(tǒng)計學顯著性差異。
　　 4實驗方法和結果
　　 在本研究的第一部分，四株胰腺癌細胞SW1990，PANC-1，T3M4和BxPC-3等用于

4、MTT法檢測吉西他濱的耐藥性，以半數(shù)抑制濃度或IC50表示；使用熒光素酶報告基因檢測Wnt信號通路活性。結果顯示，SW1990對吉西他濱耐藥性最強，伴隨著Wnt信號通路異?；罨?。對這四株細胞進行Pearson相關性檢驗分析可得經(jīng)典Wnt信號通路與吉西他濱耐藥呈非線性正相關。
　　 在本研究的第二部分，我們選擇了SW1990為研究對象。分別用Wnt信號通路的激動劑rWnt3a和抑制劑rDkk-1處理SW1990細胞，發(fā)現(xiàn)rWnt3

5、a和rDkk-1分別能有效地刺激或抑制Wnt信號通路的活性。rWnt3a對SW1990的生長和吉西他濱耐藥都有促進作用，而rDkk-1則對SW1990的生長和耐藥均無統(tǒng)計學顯著性差異。
　　 在本研究的第三部分，我們運用流式細胞儀檢測CD133、CD44、CD24和EpCAM在SW1990，PANC-1，T3M4和SW1990/Gem（SW1990耐吉西他濱細胞株）等四株胰腺癌細胞株中的表達。并且檢測用吉西他濱、rWnt3a和r

6、Dkk-1對SW1990細胞干預后細胞表面CD133的表達。結果顯示SW1990和SW1990/Gem中CD133的陽性表達率分別為5.7％和37.8％，SW1990吉西他濱處理三天CD133的陽性表達率為5.6％；PANC-1和T3M4中CD133無表達；CD44+CD24+EpCAM+細胞的比例在各株細胞間差異較大；使用rWnt3a和rDkk-1處理SW1990后，CD133+細胞的比例可分別上升（13.4％）和下降（3.0％）。<

7、br>　　 5結論
　　 胰腺癌細胞株之間對吉西他的濱耐藥性差異很大，可分為兩組：耐藥組（SW1990、PANC-1）和敏感組（T3M4、BxPC-3）：
　　 Wnt信號通路的高水平激活在胰腺癌細胞株中不是普遍現(xiàn)象；
　　 胰腺癌細胞株對吉西他濱的耐藥性與經(jīng)典的Wnt信號通路活性之間呈非線性正相關；
　　 rWnt3a和rDkk-1可有效地調節(jié)Wnt信號通路活性，rWnt3a上調信號可介導細胞對吉西他