原花青素B2、瑞香素對TNF-α誘導大鼠滑膜細胞NF-κB核轉運及其相關因子的影響.pdf

1、[目的]
　　 NF-κ B是一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因的增強子κ B序列特異結合的蛋白因子。靜息狀態(tài)在細胞漿中以無活性的形式存在，但受外界因子激活后，迅速活化，通過核轉運轉移到細胞核與DNA特異位點結合，啟動下游相關基因的表達，廣泛參與炎癥，癌癥的發(fā)生、發(fā)展。本實驗以NF-κB為靶點，研究原花青素B2(Procyanidins B2 PCB2)和瑞香素(daphnetin DA)對大鼠滑膜細胞(RSC-364)的抗炎機理。<

2、br>　　 [方法]
　　 MTT法檢測PCB2和DA對RSC-364生長增殖的影響；免疫熒光雙染色觀察PCB2和DA對TNF-α誘導的RSC-364 NF-κB的核轉運；Westernblot法檢測NF-κB(P65)、COX-2、Iκ Bα蛋白表達水平；RT-PCR檢測COX-2、IKBα mRNA的表達；ELISA試劑盒檢測細胞上清液中IL-1β、VEGF細胞因子及炎癥介質LTB4的水平；Griess Reagent法檢

3、測細胞上清液NO含量。
　　 [結果]
　　 (1)3.125μM-25μM的PCB2和6.25μM-50μM的DA對細胞的生長增殖沒有影響；(2)PCB2和DA均能明顯抑制RSC-364 NF-κB/P65核轉運并存劑量依賴關系。(3)PCB2和DA保護TNF-α誘導的RSC-364細胞IKBα降解；(4)PCB2和DA劑量性抑制COX-2基因的表達；(5)PCB2和DA降低細胞上清液中IL-1β、LTB4、VEGF、