食蚊魚(yú)（Gambusia affinis）卵黃蛋白原的誘導(dǎo)及其在環(huán)境激素檢測(cè)中的應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、　　本文通過(guò)兩步層析分離法對(duì)食蚊魚(yú)(Gmbusiaaffinis)卵黃脂蛋白(Lv)進(jìn)行分離純化。凝膠層析采用Sephacryls-300柱，在FPLC上進(jìn)行分離洗脫。一共出現(xiàn)五個(gè)洗脫峰，對(duì)各峰樣品濃縮后進(jìn)行電泳分析，第三峰中蛋白含量最高，經(jīng)鑒定為L(zhǎng)v，收集后離心濃縮上DEAE-cellulose陰離子交換柱，經(jīng)過(guò)0.1～1MNaCl梯度洗脫，得到純化的Lv。以純化后的Lv作為抗原，注射免疫制備兔抗Lv抗血清并建立起了間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸

2、附反應(yīng)(ELISA)方法來(lái)檢測(cè)雄魚(yú)體內(nèi)卵黃蛋白原(Vtg)的含量，經(jīng)PAGE電泳以及Westernblotting分析，制備的抗Lv抗血清與純化的Lv有交叉反應(yīng)，抗血清具有良好的特異性。該ELISA方法最低檢測(cè)濃度為62.5ng/ml，工作范圍為62.5～1000ng/ml。研究結(jié)果顯示，通過(guò)對(duì)室內(nèi)和野外水體原位暴露的比較，食蚊魚(yú)Vtg的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)法可以作為一種靈敏有效的環(huán)境激素檢測(cè)方法，應(yīng)用于野外水環(huán)境污染物的調(diào)查和初步分

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