稻田固氮細菌分離物的PCR-DGGE分析及苯酚降解菌株的篩選.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、稻田固氮微生物是土壤微生物資源的重要組成部分。本文采用16S rDNA-PCR-DGGE法對本實驗室以前從福建稻田土壤分離取得的八個固氮細菌分離物進行分子鑒定，發(fā)現(xiàn)每一種分離物都不同程度的被雜菌污染，即以一種固氮細菌為優(yōu)勢種，同時伴生有1-3種的劣勢種。通過測序比對，發(fā)現(xiàn)上述分離物分別與中慢生根瘤菌(Mesorhizobium sp.)、鞘氨醇單胞菌(Sphingomonas sp.)、根瘤菌(Rhizobium sp.)、慢生根瘤菌(

2、Bradurhizobium sp.)、克雷伯氏桿菌(Klebsiella sp.)、伯克霍爾德氏菌(Burkholderia cepacia)、假單胞菌(Pseudomonas sp.)、諾卡氏菌(Nocardioides)和紅球菌(Rhodococcus sp.)九個屬的固氮細菌和三個非固氮細菌屬具有高度同源性。這表明DGGE不僅是研究細菌群落結構和遺傳多樣性的有效工具，也是細菌分離物純化鑒定的重要手段。 在了解細菌分離物組

3、成的基礎上，用選擇性培養(yǎng)基進一步分離純化后，通過基因挖掘，從一菌株克隆到苯酚羥化酶的基因，經(jīng)測序比對后發(fā)現(xiàn)其與Alcaligenes sp.IS-18的苯酚羥化酶基因的核苷酸同源性為98％，由此推導的氨基酸序列同源性為100％。對該菌16S rDNA進行PCR擴增、測序，運用BLAST比對分析和相關軟件確定其在系統(tǒng)發(fā)育中的位置，并結合生理生化鑒定結果，鑒定為Alcaligenes sp．命名為BC2008。其在接種量為1:300的條件下

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