異基因樹突狀細胞瘤苗治療肺癌的基礎(chǔ)和前臨床研究.pdf

1、第一部分目的：探討熱休克處理瘤細胞的溶解物沖擊的異基因樹突狀細胞能否誘生抗腫瘤T細胞免疫。 方法：應(yīng)用熱休克處理(43℃加熱1hr/37℃保溫3hrs)的C57小鼠來源的Lewis肺癌細胞系(LLC)制備的腫瘤溶解物(HLTCL)沖擊異基因小鼠(BALB/CKd or 615Kk)骨髓細胞衍生的樹突狀細胞(Bm-DC)作為瘤苗。應(yīng)用Western Blot 檢測 HLTCL 中可誘導 HSP70 表達。應(yīng)用體外吞噬實驗分析小鼠I

2、mBM-DC 攝取 HLTCL 能力；藉FCM和細胞因子檢測試劑盒分析吞噬HLTCL對小鼠異基因 Bm-DC 表型和分泌IL-12的影響。應(yīng)用CFSE標記DC進行體內(nèi)示蹤試驗，藉助FCM和共聚焦熒光顯微鏡觀察確認受體DC對異基因DC攝取。藉細胞毒測定(LDH法)和細胞因子檢測(ELISA)分析HLTCL沖擊的異基因Bm-DC免疫接種的小鼠脾細胞殺傷LLC和產(chǎn)生Th-1相關(guān)細胞因子的能力。最后，藉C57小鼠LLC移植瘤的免疫預防和接種1天

3、的早期帶瘤鼠的治療實驗評價HLTCL沖擊的異基因BM-DC瘤苗的免疫效應(yīng)。 結(jié)果：1.熱休克可以明顯增加LLC-TCL 中可誘導Hsp70表達。2.小鼠 ImBM-DC 能充分攝取 HLTCL。3.異基因小鼠 ImBM-DC攝取HLTCL后有促進DC成熟的效應(yīng)(增加DC表面共刺激分子表達和促進其IL-12分泌)。4.體內(nèi)皮下注射HLTCL沖擊的異基因小鼠Bm-DC觀察到有促進受鼠DC攝取異基因Bm-DC的效應(yīng)。5.HLTCL 沖

4、擊的異基因Bm-DC免疫的C57BL 小鼠脾細胞能特異性殺傷活LLC，分泌Th-1相關(guān)的細胞因子(高水平IFN-γ和低水平IL-4和IL-10)。6.C57BL小鼠LLC移植瘤免疫保護實驗和早期帶瘤鼠治療實驗證實，免疫接種HLTCL 沖擊的異基因Bm-DC能夠阻止或延緩LLC腫瘤的生長，其產(chǎn)生的免疫保護效應(yīng)要比HLTCL沖擊的同系DC強。 結(jié)論：熱休克處理瘤細胞的溶解物沖擊的異基因樹突狀細胞瘤苗接種能夠誘生抗腫瘤T細胞免疫。

5、 第二部分目的：研究低氧標記物CA-9、HIF-1α的表達、腫瘤免疫功能有關(guān)的DC，T淋巴細胞浸潤、以及腫瘤壞死程度在Ⅰ期非小細胞肺癌患者中的臨床和預后意義。 方法：應(yīng)用免疫組化法檢測59例Ⅰ期非小細胞肺癌患者的CA-9、HIF-1α、CDla、CD208、和CD3的表達。 結(jié)果：CDla、CD3 在腺癌中的表達明顯高于鱗癌；腫瘤高壞死或CA-9高表達者，其腫瘤中的CDla浸潤都低；CD208陰性表達或腫瘤高壞死的患

6、者，其生存率明顯低于陽性者或低壞死者；術(shù)后化療組與未化療組在生存率上未發(fā)現(xiàn)有顯著性差異，但進一步分層分析顯示：在 CA-9 陽性和CD208 陰性的患者中，都發(fā)現(xiàn)術(shù)后化療組的生存率短于未行化療組。 結(jié)論：非小細胞肺癌早期即有免疫細胞的浸潤，腫瘤低氧、不同病理學類型和腫瘤的壞死程度可能影響免疫細胞的浸潤；腫瘤的壞死程度和成熟DC的浸潤程度影響患者的生存率；檢測CA-9和CD208表達可能對工期非小細胞肺癌患者術(shù)后是否應(yīng)該化療有指導