富硒靈芝液體深層培養(yǎng)及營養(yǎng)成分分析.pdf

1、靈芝是我國珍貴的藥用真菌，硒是人體必需的微量元素。以靈芝菌絲體作為載體，利用活化硒礦水作為硒源，進行生物富硒的研究在國內外鮮有報道。因此，本研究對于探索新的生物富硒途徑、提供新的有機硒資源具有重要意義。本研究的主要實驗內容及研究結論如下： 首先，通過快速登高法和響應面分析法得出活化硒礦水為唯一硒源條件下靈芝深層培養(yǎng)的最佳培養(yǎng)基組成：葡萄糖2.13％、麩皮汁3.96％、KH2PO40.3％和MgSO4·7H2O0.09％。在優(yōu)化條

2、件下，得到的菌絲體生物量在18g·L-1左右，菌絲體中總硒含量在150μg·g-1以上，富硒率達到55％。 其次，通過正交試驗優(yōu)化了活化天然硒礦粉制備含硒水溶液的工藝條件：邊攪拌邊將300g硒礦粉添加到600mL0.6mol·L-1氨水中氨解72h，然后加熱至近干并重新補充氨水氨解兩次，再用pH8.0的磷酸緩沖液進行磷酸化處理后，超聲波提取0.5h；在優(yōu)化條件下硒礦水中硒濃度可以達到50μg.mL-1；混合硒源(活化硒礦水+亞硒

3、酸鈉)試驗結果表明，當培養(yǎng)基中添加15μg·mL-1的硒(5μg·mL-1來自于硒礦水、10μg·mL-1來自亞硒酸鈉)時，菌絲體生物量穩(wěn)定在18g·L-1左右，總硒含量可提高到260μg·g-1左右，富硒率在30％以上。 再次，在搖瓶實驗的基礎上進行了5L發(fā)酵罐擴大培養(yǎng)并對發(fā)酵罐參數進行了優(yōu)化。通過單因素試驗、正交試驗和發(fā)酵罐在線控制方法，優(yōu)化得到靈芝在發(fā)酵罐中生長的最優(yōu)條件為：培養(yǎng)溫度28℃，通氣量1.2L·min-1，初始

4、pH6.5，攪拌速度120r·min-1，接種量10％，分階段pn控制值5.0，DO值(與轉速串聯)6％，此種條件下菌絲體生物量可達到14.91g·L-1，總硒含量354μg·g-1，富硒率35.2％。 最后，測定了所培養(yǎng)靈芝中的營養(yǎng)素含量并分析了硒的存在狀態(tài)。富硒靈芝菌絲體中蛋白質含量為16.28％，遠高于普通靈芝的12.31％；原子吸收測定結果表明富硒靈芝中Ca、Fe、Zn、Se的含量分別為398.1μg·g-1、338.7