扶正祛瘀中藥對體外培養(yǎng)子宮肌瘤細胞基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9及其抑制物TIMP-1表達的影響.pdf

1、　　目的：本實驗由中醫(yī)理論指導(dǎo),結(jié)合分子生物學(xué)技術(shù),對扶正祛瘀法防治子宮肌瘤(uterine leiomyoma,UL),扶正祛瘀中藥—理沖湯對體外培養(yǎng)子宮肌瘤細胞外基質(zhì)(extracellular matrix,ECM)代謝的重要調(diào)節(jié)酶基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)及其基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitors of metalloproteinase-1,T

2、IMP-1)表達的影響進行觀察和分析。探討扶正祛瘀中藥對子宮肌瘤細胞分子水平的影響及其對腫瘤細胞的抑制作用的機理,為中醫(yī)藥治療子宮肌瘤提供新的切入點和研究思路,為其臨床防治及其他相關(guān)科學(xué)研究提供實驗依據(jù)。
　　方法：用wistar大鼠制備帶藥血清,將大鼠隨機分為空白對照組、理沖湯高、低劑量組和化藥對照組,每日2次進行灌胃給藥,間隔6h,連續(xù)灌胃2天?？瞻讓φ战M大鼠每日灌以蒸餾水。第3天給藥2 h后再次給藥,1 h后用10%水合氯

3、醛腹腔注射麻醉大鼠,心臟采血。離心取上清液,滅活并微孔濾膜過濾除菌分裝后,-20℃保存?zhèn)溆?。?個月均未接受過激素和其他藥物治療的行子宮肌瘤全切術(shù)患者進行取材,選擇肌瘤組織中間部分采用組織塊培養(yǎng)法進行原代細胞培養(yǎng)。細胞傳代后待第二代細胞生長貼壁達80%后調(diào)整細胞濃度接種至6/24/96孔板,分為正常對照組、空白對照組、理沖湯高、低劑量組和化藥對照組,用大鼠含藥血清進行各組對應(yīng)給藥。倒置顯微鏡下HE染色法觀察細胞形態(tài),CCK-8法檢測細胞

4、增殖能力和腫瘤細胞抑制率,蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)技術(shù)檢測體外培養(yǎng)子宮肌瘤細胞基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9及其抑制因子TIMP-1的蛋白表達。
　　結(jié)果：(1)HE染色光鏡下觀察：正常體外培養(yǎng)的子宮肌瘤細胞呈梭形,核仁清晰,胞漿透明飽滿,與空白對照組相比,理沖湯高、低劑量組和化藥對照組的細胞均出現(xiàn)不同程度的沙化及胞漿萎縮乃至細胞死亡的狀況。
　　(2)CCK-8檢測對腫瘤細胞增值的影響：與空白對照組相比

5、,理沖湯高、低劑量組及化藥對照組OD值均顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　(3)蛋白質(zhì)印跡(western blotting)技術(shù)觀察結(jié)果：
　　MMP-9：與空白對照組比較,理沖湯低劑量組、化藥對照組MMP-9的陽性表達均明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義；而與空白對照組比較,理沖湯高劑量組MMP-9的陽性表達雖有所降低,但差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義；與化藥對照組相比,理沖湯高、低劑量組均無顯著差異；
　　TIMP-1：與空

6、白對照組比較,理沖湯高劑量組、低劑量組及化藥對照組的TIMP-1的陽性表達明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義；與化藥對照組相比,理沖湯高、低劑量組均無顯著差異。
　　結(jié)論：扶正祛瘀中藥理沖湯能明顯改變體外培養(yǎng)子宮肌瘤細胞的形態(tài),對其生長和增殖有顯著抑制作用,能降低基質(zhì)金屬蛋白酶 MMP-9 和升高其抑制物TIMP-1在體外培養(yǎng)子宮肌瘤細胞外基質(zhì)中的表達水平；MMP-9和TIMP-1在子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用,參與子宮肌瘤的發(fā)病機制