1-甲基色氨酸對硝酸甘油致偏頭痛大鼠腦干c-Fos蛋白表達的影響.pdf

1、目的:通過對SD(Sprague Dawley)大鼠預防性給予吲哚胺2,3一二氧化酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)競爭性抑制劑1-甲基色氨酸(1-methyltryptophan,1-MT)觀察其對硝酸甘油誘導偏頭痛大鼠的行為學的改變及三叉神經脊束核尾部(Caudal trigeminal nucleus,TNC)處c-Fos蛋白表達的影響,以初步探討IDO抑制劑對偏頭痛發(fā)作的防治作用及其可能的作用機制

2、。
　　 方法:
　　 1.30只大鼠按體重大小編號,使用分層隨機法分為假模型組(8只)和模型組(22只),參照Tassorelli法制作實驗性偏頭痛大鼠模型。模型組大鼠經皮下注射硝酸甘油,當實驗出現兩耳發(fā)紅、前肢撓頭次數及爬籠次數增多等行為癥狀學表現,則提示造模成功。用隨機法將模型組分為模型對照組(11只)和干預組(11只)。
　　 假模型組:經胃灌注生理鹽水,每日1次,共7次,普通飼養(yǎng)。于第7次灌胃后給予生理

3、鹽水皮下注射。
　　 模型對照組:給予生理鹽水灌胃,每日1次,共7次,普通飼養(yǎng)。于第7次灌胃后給予硝酸甘油皮下注射,誘發(fā)偏頭痛。
　　 干預組:給予1-MT灌胃,每日1次,共7次,普通飼養(yǎng)。于第7次灌胃后給予皮下注射硝酸甘油,誘發(fā)偏頭痛。
　　 2.造模成功后即開始觀察大鼠行為學變化。主要包括以下內容:①雙耳發(fā)紅:觀察并記錄偏頭痛大鼠兩耳發(fā)紅的起始和終止時間;②撓頭:觀察并記錄偏頭痛大鼠頻繁撓頭出現的起始和終止時

4、間,以大鼠出現連續(xù)撓頭次數達5次以上為撓頭出現時間標準,以一個時間段中大鼠撓頭次數少于5次并出現倦怠和疲乏為撓頭消失時間標準;⑨撓頭、爬籠次數:從造模之時起,以30min作為一個時間段,采用持續(xù)時間分段計數的方法觀察每個時間段內大鼠造模后撓頭、爬籠的次數。
　　 3.受試動物于偏頭痛再次誘發(fā)后4h,腹腔注射麻醉、甲醛灌注,仰臥固定于腦立體定位儀上,自延髓閂部開始向尾部切取約4mm腦干組織。用免疫組化方法對c-Fos蛋白進行染色,

5、然后用普通光學顯微鏡觀察c-Fos蛋白表達情況,并隨機選取5個視野,記錄陽性細胞數。
　　 結果
　　 1.行為學變化:假模型組大鼠皮下注射等量生理鹽水后,僅有個別大鼠出現次數很少的前肢搔頭,撓頭及爬籠。22只大鼠皮下注射硝酸甘油造模后4min左右均出現以上行為癥狀學表現,與假模型組比較有統計學意義(p＜0.05),此行為學癥狀持續(xù)約3h,繼而出現活動減少、蜷臥。模型對照組大鼠第二次皮下注射硝酸甘油后大鼠的行為學表現與造

6、模時的表現基本一致;干預組大鼠第二次皮下注射硝酸甘油后也出現耳紅、撓頭的現象,但其開始時間晚于模型組(n=22)及模型對照組(n=11),結束時間早于模型組及模型對照組,持續(xù)時間較模型組及模型對照組縮短;且撓頭及爬籠次數較模型組和模型對照組明顯減少,與模型組和模型對照組比較均有統計學意義。
　　 2.c-Fos蛋白表達:光學顯微鏡下可見陽性細胞形態(tài)學表現為黃褐色,類圓形或卵圓形,核染為主,主要分布在三叉神經脊束核尾核(TNC);

7、切片背景為無色或淡黃色,兩者易于區(qū)分。模型對照組較假模型組大鼠腦干標本c-Fos免疫陽性細胞明顯增多(p＜0.05)。干預組大鼠腦干標本c-Fos免疫陽性細胞也增多,但與模型對照組比較顯著減少,有統計學意義(p＜0.05)
　　 結論:
　　 l-MT可明顯改善偏頭痛大鼠的行為學變化,并能有效抑制其腦干TNC處c-Fos蛋白的表達,說明抑制IDO的活性可能對偏頭痛發(fā)作具有防治作用。這一結果進一步印證了犬尿氨酸通路可能與偏