Notch信號(hào)通路在慢性胰腺炎誘導(dǎo)胰腺癌發(fā)生過(guò)程中的作用機(jī)制.pdf

1、背景及目的:
　　 胰腺癌是惡性程度最高的消化系統(tǒng)腫瘤之一，由于其早期診斷困難、進(jìn)展快、預(yù)后差在腫瘤致死的病因中高居第四位。因此揭示胰腺癌的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，以期早期預(yù)防和早期治療具有重要意義。PK小鼠模型是第一個(gè)能準(zhǔn)確復(fù)制人類(lèi)從PanIN進(jìn)展為PDAC全過(guò)程的轉(zhuǎn)基因小鼠模型。研究發(fā)現(xiàn)，人類(lèi)慢性胰腺炎患者患胰腺癌的風(fēng)險(xiǎn)增加16倍。在人胚胎發(fā)育過(guò)程中起重要作用的Notch信號(hào)通路在慢性胰腺炎及胰腺癌中都出現(xiàn)了再激活。慢性胰腺炎可明顯加

2、速表達(dá)K-RasG12V致癌基因小鼠的胰腺癌發(fā)展。然而慢性胰腺炎加速胰腺癌發(fā)展的具體機(jī)制尚不明確。因此，本實(shí)驗(yàn)利用PK小鼠模型，旨在研究Notch信號(hào)通路在慢性胰腺炎誘導(dǎo)胰腺癌發(fā)生過(guò)程中的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 將LSL-KrasG12D小鼠與PDX1-Cre小鼠雜交，通過(guò)PCR檢測(cè)其雜交子代的基因型，從而獲得雜合陽(yáng)性的LSL-KrasG12D; PDX1-Cre小鼠。將其分為3組，分別為溶劑液干預(yù)組，雨蛙肽誘導(dǎo)

3、慢性胰腺炎組，雨蛙肽合并Notch信號(hào)通路阻斷劑DBZ共同干預(yù)組。每組再分為兩個(gè)干預(yù)時(shí)間，即5天和12天。在藥物干預(yù)結(jié)束后的第二天處死小鼠并取材。胰腺組織分為3部分，其中一部分進(jìn)行石蠟包埋，用于后續(xù)HE染色評(píng)估病變及免疫組化在蛋白水平檢測(cè)Notch信號(hào)通路的活性及細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)情況;一部分用于qRT-PCR在mRNA水平檢測(cè)Notch信號(hào)通路的活性;另一部分則用于western blotting在蛋白水平檢測(cè)Notch信號(hào)通路的活性。

4、
　　 結(jié)果:
　　 (1)LSL-KrasG12D小鼠與PDX1-Cre小鼠雜交后共獲得雜交子代近800只，其中雜合陽(yáng)性的LSL-KrasG12D; PDX1-Cre小鼠約140只，其陽(yáng)性率約為1/5。
　　 (2)藥物干預(yù)5天后，雨蛙肽干預(yù)組及雨蛙肽合并DBZ干預(yù)組小鼠都出現(xiàn)了慢性胰腺炎，前者病變從大體到鏡下病理均明顯重于后者，溶劑液干預(yù)組小鼠的胰腺組織正常。藥物干預(yù)12天后，雨蛙肽干預(yù)組及雨蛙肽合并DBZ干

5、預(yù)組小鼠胰腺大體均出現(xiàn)了明顯瘤變，鏡下前者PanINs及PDAC的浸潤(rùn)程度重于后者。溶劑液干預(yù)組小鼠胰腺大體正常，出現(xiàn)了局灶性的PanIN1的病變。
　　 (3)雨蛙肽合并DBZ干預(yù)組的慢性炎癥細(xì)胞T淋巴細(xì)胞(CD3+)及巨噬細(xì)胞(F4/80+)的浸潤(rùn)程度顯著低于雨蛙肽干預(yù)組，在慢性胰腺炎病變?yōu)橹鲿r(shí)，前者血清炎癥因子TNF-α及IL-6水平顯著低于后者。在給予DBZ藥物干預(yù)12天后，Notch信號(hào)通路的部分活性受到了抑制。qRT

6、-PCR結(jié)果顯示Notch4、 Dll4、Hes1、Hey1的表達(dá)顯著降低。Western blotting結(jié)果顯示Notch2、Notch4及Dll4的表達(dá)出現(xiàn)了顯著降低，Notch3和Jagged2的表達(dá)也出現(xiàn)了輕度的降低，Hes1的表達(dá)無(wú)明顯變化。免疫組化結(jié)果顯示Notch1、Notch4、Jagged1、Dll1、Dll4及Hes1的表達(dá)出現(xiàn)了顯著降低;此外，在給予DBZ干預(yù)5天后，Notch1、Notch2、Notch3、Ja

7、gged1及Hes1的表達(dá)也出現(xiàn)了顯著降低。
　　 (4)PanIN1A具有富含粘液的特征，其中可見(jiàn)殘余成熟腺泡細(xì)胞標(biāo)記物糜蛋白酶、淀粉酶表達(dá)陽(yáng)性的腺泡細(xì)胞，反映了由腺泡細(xì)胞向?qū)Ч芗?xì)胞轉(zhuǎn)化的過(guò)渡狀態(tài)。其對(duì)不成熟腺泡細(xì)胞標(biāo)記物叢生蛋白及PDX1染色的陽(yáng)性則反映了其不成熟腺泡細(xì)胞特征，PanINs及PDAC對(duì)CK19表達(dá)陽(yáng)性，表明了PanINs及PDAC的導(dǎo)管細(xì)胞特性。此外，雨蛙肽干預(yù)12天組的PanINs上皮細(xì)胞Ki67陽(yáng)性細(xì)胞百