Graves病易感基因的篩查和功能初步研究.pdf

1、Graves病是一種常見的多基因疾病，同時是一種最常見的器官特異性自身動脈粥樣硬化，其發(fā)生是由遺傳因素和環(huán)境因素的共同影響所造成的。通過連鎖分析，人們發(fā)現(xiàn)了許多與Graves病可能相關的染色體易感區(qū)段，其中位于5q31區(qū)段的結果同時得到了中國和日本研究小組的確認，因此在這一區(qū)域很可能包含一個至少在東亞人群中比較特異的易感位點。本文對Graves病易感基因的篩查和功能進行了研究。主要內(nèi)容如下： ⑴在Sq31區(qū)域Lod值最高的Mar

2、ker D5s2090附近的3.OMB區(qū)域內(nèi)，我們按照每15Kb選擇一個SNP的方法，總共選擇了179個SNPs進行篩選，其中有25個SNPs位點有統(tǒng)計學差異，并以rs1368408處的差異最為顯著，P值達到3.69×10-5。接下來我們將關注的目光進一步縮小到rs1368408附近的1.0MB區(qū)域。 ⑵將這一區(qū)段包含的全部11個基因的外顯子和啟動子區(qū)進行全測序，共發(fā)現(xiàn)了83個SNPs位點；同時對于基因間的區(qū)域，按照每5KB一個

3、SNP位點的原則從NCBI的dbSNP數(shù)據(jù)庫共選擇了39個SNPs位點。將這1.0MB區(qū)域內(nèi)選擇的全部122個SNPs，采用MassArray Sequenom技術，對山東人群和上海人群進行測序。通過病例對照分析，發(fā)現(xiàn)在山東、上海和合并人群中分別有20、24和20個SNPs位點有統(tǒng)計學差異，其中以UGRP1基因啟動子區(qū)域的SNP位點統(tǒng)計學差異最顯著。接著我們對兩組單獨人群和合并人群UGRP1基因的9個SNPs位點組成的單體型進行了分析，

4、結果顯示同時包含啟動子區(qū)P1+P2或P1+P3的單體型統(tǒng)計學差異最明顯。同時我們對山東人群進行了兩位點Logistic回歸分析發(fā)現(xiàn)：UGRP1基因啟動區(qū)的P1和P2位點最有可能是Graves病的易感致病位點。 ⑶在1.0Mb區(qū)域初步確定了Graves病的易感基因UGRP1后，我們在更大規(guī)模的我國漢族北方和南方人群以及小規(guī)模新疆少數(shù)民族哈薩克族和維吾爾族人群進行了驗證工作，進一步證實了UGRP1是Graves病的易感基因這一結論。

5、 ⑷為了從功能方面找到UGRP1易感基因與Graves病發(fā)病機制的關系，首先在體外試驗中，我們通過熒光素酶試驗發(fā)現(xiàn)：相對于正常的啟動子序列，啟動子區(qū)含有單體型改變的UGRP1基因轉錄水平明顯下降。同時凝膠阻滯實驗也證實UGRP1基因啟動子區(qū)P1-P3位點的改變，均可影響它們與轉錄因子結合的能力。 ⑸體內(nèi)試驗的Real-time PCR和等位基因特異性轉錄水平定量試驗表明致病性單體型P1+P2及其突變等位基因和致病性單體型

6、P1+P3驅動的UGRP1基因mRNA表達明顯下降。RT-PCR試驗顯示UGRP1基因的受體MARCO在很多免疫相關的組織都有表達，這進一步提示UGRP1基因可能與Graves病這種自身免疫性疾病有很強的相關性。 ⑹選擇含有P1+P2和P1+P3單體型改變的Graves病人的組織做基因芯片分析，希望通過免疫相關基因的改變，對進一步研究UGRP1基因與Graves病發(fā)病之間的相互關系有提示作用。結果發(fā)現(xiàn)在兩組病人變化相同的基因中，