四川綿陽地區(qū)豬藍(lán)耳病檢測(cè)及其分子流行病學(xué)分析.pdf

1、豬繁殖呼吸綜合征PRRS(Porcine reproductive and respiratory syndrome，又稱豬藍(lán)耳病)是由PRRSV感染造成的，目前在世界范圍內(nèi)廣泛流傳，主要導(dǎo)致母豬的繁殖能力差，抵抗能力弱，繼發(fā)疾病率和高死亡率較高，是現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)重點(diǎn)預(yù)防的疾病，以避免給養(yǎng)豬業(yè)帶來的災(zāi)難性損失，同時(shí)維護(hù)畜產(chǎn)品安全和環(huán)境衛(wèi)生。為及時(shí)、有效地了解地域性PRRS病的感染和流行情況，ELISA檢測(cè)抗體的方法和RT-PCR檢測(cè)抗原的方

2、法在生產(chǎn)實(shí)踐和實(shí)驗(yàn)室得到了最經(jīng)常的使用，以及從分子生物學(xué)層面分析高致病性PRRSV的遺傳變異情況，為下一步科學(xué)的防控該病提供理論依據(jù)。
　　本論文通過ELISA方法檢測(cè)2013、2014年綿陽9個(gè)地區(qū)1404份血清進(jìn)行了豬藍(lán)耳病ELSA抗體檢測(cè)，免疫PRRSV疫苗后血清的抗體平均陽性率為80.8％（達(dá)到了農(nóng)業(yè)部的基本要求70％以上），未免疫豬藍(lán)耳疫苗的血清抗體陽性率為14.3％。從不同采樣群體來看，規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)(91.8％)＞散養(yǎng)戶

3、(81.7％)＞屠宰場(chǎng)(70.5％);2014年的抗體平均合格率較2013年平均合格率有所下降。還通過RT-PCR方法檢測(cè)本實(shí)驗(yàn)中被檢測(cè)的綿陽地區(qū)部分疑似發(fā)病豬場(chǎng)共采集病料78份，檢測(cè)結(jié)果平均陽性率從大到小為高致病性PRRSV(35.90％)＞經(jīng)典PRRSV(17.95％)＞HP-PRRSV+PRRSV(11.65％);而該地區(qū)被檢測(cè)的部分屠宰樣品282份中，經(jīng)典PRRSV的陽性率為2.84％，高致病性PRRSV陽性率為11.70％，無

4、HP-PRRSV+PRRSV混合感染。HP-PRRSV依然是該地區(qū)豬藍(lán)耳病感染率最高的毒株類型。經(jīng)過抗原檢測(cè)后的病料中篩選出69個(gè)毒株，然后對(duì)目的基因Nsp2、ORF5進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增、純化、測(cè)序分析。49個(gè)Nsp2基因序列的核苷酸之間的同源性為90.2％～100％，推導(dǎo)氨基酸的同源性為73.7％～100％;與LV核苷酸同源性為49.7％～50.0％，推導(dǎo)氨基酸的同源性為31.1％～37.2％;與VR-2332、MLV核苷酸同源性為

5、79.2％～82.6％，推導(dǎo)氨基酸的同源性為60.8％～75.0％;與國(guó)內(nèi)2006年以前BJ-4、HB-1(sh)、HN1毒核苷酸的同源性為79.0％～95.1％，推導(dǎo)氨基酸的同源性為70.9％～92.6％;與國(guó)內(nèi)2006年及以后分離的毒株JXA1、SY0608等核苷酸同源性為93.1％～98.6％，推導(dǎo)氨基酸的同源性為83.0％～98.5％。同時(shí)獲得的20個(gè)ORF5之間核苷酸同源性為91.9％～100％，推導(dǎo)其氨基酸的同源性為88.0

6、％～100％;與LV同源性為62.6％～65.8％，推導(dǎo)其氨基酸的同源性為56.6％～59.2％;與VR-2332同源性為88.2％～90.2％，推導(dǎo)其氨基酸的同源性為86.5％～89.0％;與2006年以前毒株HN1同源性為87.1％～90.2％，氨基酸的同源性為84.5％～90.0％;與2006年及以后毒株JXA1、SXHZ01同源性為95.2％～99.2％，氨基酸的同源性為89.0％～99.0％。預(yù)測(cè)GP5的N-糖基化位點(diǎn)以4～5