不同證候食管癌差異表達(dá)基因研究.pdf

1、　　目的：利用基因芯片技術(shù)探討食管癌不同階段(癌組織、癌旁組織、正常組織)相關(guān)基因的表達(dá),篩選不同證候食管癌組織的差異表達(dá)基因,初步揭示食管癌不同證候之間在基因表達(dá)上的相互關(guān)系,對(duì)其可能的分子機(jī)制進(jìn)行分析。
　　方法：①建立食管癌組織標(biāo)本庫及食管癌臨床資料數(shù)據(jù)庫,篩選嚴(yán)格配對(duì)的 21 例食管癌癌組織、癌旁組織及正常黏膜組織。對(duì) 21 例食管癌癌組織、癌旁組織、正常黏膜組織以及不同證候的痰氣交阻證( P)、瘀血內(nèi)結(jié)證( B)、津

2、虧熱結(jié)證( F)和氣虛陽微證( Q)的表達(dá)譜依次進(jìn)行比較；②提取 21 例食管癌癌組織、癌旁組織及正常黏膜組織的總RNA,瓊脂糖凝膠電泳質(zhì)檢,總 RNA 的純化,逆轉(zhuǎn)錄成 cDNA,并用單標(biāo)法 Cy3-dUTP 標(biāo)記于食管癌癌組織、癌旁組織及正常組織后制成探針,與基因表達(dá)譜芯片進(jìn)行雜交,然后掃描芯片熒光信號(hào)圖像,采用 SAS軟件對(duì)芯片圖像進(jìn)行分析,最后得到篩選的結(jié)果。
　　結(jié)果：①通過 SAS 軟件分析,癌組織與癌旁組織差異基

3、因 2505 個(gè),癌組織與正常組織差異基因 2659 個(gè)。P 組與 B 組的癌組織共有差異基因 18個(gè)；癌旁組織共有差異基因 10 個(gè)；正常組織共有差異基因 6 個(gè)；P 組與F 組的癌組織共有差異基因 52 個(gè)；癌旁組織共有差異基因 8 個(gè)；正常組織共有差異基因 2 個(gè)；P 組與 Q 組的癌組織共有差異基因 52 個(gè)；癌旁組織共有差異基因 24 個(gè)；正常組織共有差異基因 46 個(gè)；Q 組與 B 組的癌組織共有差異基因 12 個(gè)；癌旁組織

4、共有差異基因 5 個(gè)；正常組織共有差異基因 84 個(gè)；Q 組與 F 組的癌組織共有差異基因 26 個(gè)；癌旁組織共有差異基因 6 個(gè)；正常組織共有差異基因 8 個(gè)；B 組與 F 組的癌組織共有差異基因 22 個(gè),癌旁組織共有差異基因 8 個(gè),正常組織共有差異基因 15 個(gè)。②對(duì)食管癌不同階段篩選出的差異基因進(jìn)行 GO分類,主要分為三大類(細(xì)胞組成、分子功能和生物學(xué)過程)其中將這些差異基因按分子功能分主要涉及催化活性、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、分子轉(zhuǎn)運(yùn)、結(jié)

5、合、酶活性調(diào)節(jié)、轉(zhuǎn)錄活性調(diào)節(jié)、蛋白運(yùn)輸功能、細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡等功能過程。③對(duì)食管癌不同階段篩選出的差異基因進(jìn)行信號(hào)通路( pathway)分析,篩選出的主要信號(hào)通路為 ： Neuroregulin receptor degredation protein-1 Controls ErbB3 receptor recycling,cdc25 and chk1 Regulatory Pathway in response to DNA dama

6、ge , Inhibition of Matrix Metalloproteinases , Small Leucine-rich Proteoglycan (SLRP) molecule,Mechanism of Acetaminophen Activity and Toxicity 等主要的信號(hào)通路。對(duì)食管癌不同證候篩選出的差異基因進(jìn)行信號(hào)通路( pathway)分析： P 組和 B 組存在的差異基因進(jìn)行信號(hào)通路分析主要以 TSP-

7、1 Induced Apoptosis in Microvascular Endothelial Cell ,Drug metabolism - cytochrome P450 - Homo sapiens 和 Drug metabolism - other enzymes - Homo sapiens (human)通路為主； P 組和 F 組存在的差異基因進(jìn)行信號(hào)通路分析發(fā)現(xiàn)主要與 Dendritic cells in regula

8、ting TH1 and TH2 Development, Sonic Hedgehog (SHH) Receptor Ptc1 Regulates cell cycle 和 ADP-Ribosylation Factor,通路有關(guān)；對(duì) P 組和 Q 組存在的差異基因進(jìn)行信號(hào)通路分析主要以 Sonic Hedgehog (SHH) Receptor Ptc1 Regulates cell cycle, Leukocyte transen

9、dothelial migration - Homo sapiens (human)、Antigen Dependent B Cell Activation、Alternative Complement Pathway, Small Leucine-rich Proteoglycan (SLRP) molecules 通路為主；對(duì) Q 組和 B 組存在的差異基因進(jìn)行信號(hào)通路分析主要以 Rab GTPases Mark Targets I

10、n The Endocytotic Machinery,Drug metabolism - cytochrome P450 - Homo sapiens (human), Transcriptional activation of dbpb from mRNA、Classical Complement Pathway, Complement Pathway 通路為主；對(duì) Q 組和 F 組存在的差異基因進(jìn)行信號(hào)通路分析主要以 Limone

11、ne and pinene degradation - Homo sapiens (human),Th1/Th2 Differentiation, The Co-Stimulatory Signal During T-cell Activation、Phospholipase C-epsilon pathway 通路為主；對(duì) B 組和 F 組存在的差異基因進(jìn)行信號(hào)通路分析主要以 Bone Remodelling, IL 17 Signa

12、ling Pathway, Drug metabolism -cytochrome P450 - Homo sapiens (human) 、Endocytosis - Homo sapiens (human)通路為主。
　　結(jié)論：①食管癌不同階段之間有其各自基因表達(dá)譜。其中神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白受體降解蛋白 1 調(diào)控 ErbB3 受體再循環(huán)信號(hào)傳導(dǎo)通路、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制信號(hào)通路、細(xì)胞周期信號(hào)傳導(dǎo)通路為食管癌三大主要信號(hào)傳導(dǎo)通路；②食

13、管癌中醫(yī)不同證候之間有其各自基因表達(dá)譜,痰氣交阻證候中差異基因功能主要是 DNA 甲基化、細(xì)胞增殖、DNA 復(fù)制和酶活性調(diào)節(jié)；津虧熱結(jié)證候中差異基因功能主要是 DNA 代謝過程、有絲分裂期、磷代謝過程；瘀血內(nèi)結(jié)證候中差異基因功能主要是有絲分裂細(xì)胞周期、核分裂、細(xì)胞(核)分裂、細(xì)胞增殖；氣虛陽微證候中差異基因功能主要是誘導(dǎo)細(xì)胞增殖和遷移、磷酸化作用和蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)。③對(duì)食管癌中醫(yī)不同證候差異基因的信號(hào)通路分析,細(xì)胞周期信號(hào)傳導(dǎo)通路均涉及到食管