卡介苗（BCG）有效成分及Ag85B免疫調節(jié)機制的實驗研究.pdf

1、目的：提取、分離、純化并且鑒定BCG的有效成分，分析BCG不同有效成分及Ag85B對小鼠脾淋巴細胞的增殖作用及誘導小鼠淋巴細胞產(chǎn)生細胞因子的作用探討卡介苗、其有效組分及Ag85B的免疫調節(jié)活性。 方法： 1.采用MTT法測定不同濃度的卡介苗對小鼠脾淋巴細胞的增殖作用。 2.采用ELISA方法檢測經(jīng)過不同濃度卡介苗作用后誘導小鼠脾淋巴細胞分泌IL-2、TNF-α、INF-γ等細胞因子的含量。 3.采用酶裂解

2、法和超聲波破碎法對BCG進行裂解，提取其活性蛋白成分。 4.采用紫外吸收比色法測定提取蛋白的純度；應用考馬斯亮蘭G250方法測定提取物的蛋白含量。 5.采用葡聚糖凝膠層析方法對BCG提取物進行組分分離。采用SDS-PAGE凝膠電泳方法對層析后的BCG提取物進行純度及分子量的鑒定。 6.將構建的pGESAg85B/BL21活化后接種于LB培養(yǎng)基中，異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導重組蛋白的表達，包涵體變性后經(jīng)梯度

3、濃度尿素復性,GSTSepharose親和層析、凝血酶切除GST并再次親和層析純化(本過程均在日本大阪高分子化學實驗室完成)。 7.采用MTT法測定BCG有效提取成分及Ag85B對小鼠脾淋巴細胞的增殖作用，同時采用ELISA方法檢測經(jīng)過BCG有效提取成分及Ag85B誘導作用后小鼠脾淋巴細胞分泌IL-2、TNF-α、INF-γ等細胞因子的含量。 8.所得數(shù)據(jù)與BCG的相關數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。 結論： 1.卡介

4、苗對于小鼠脾淋巴細胞的增殖及誘導細胞因子的產(chǎn)生具有促進作用，而且，這種作用具有一定的劑量效應關系。 2.BCG及其有效提取成分和Ag85B對小鼠脾淋巴細胞都具有促進增殖的作用，而且隨著濃度的增加這種促進作用不斷增強。當卡介苗提取物濃度達到640μg/ml時，這種增殖作用最強；Ag85B濃度達到100μg/ml時，這種增殖作用最強。比較而言，Ag85B的作用最為顯著。 3.BCG的提取物中的BCGE2及BCGE3對于小鼠脾