扶正化瘀復方調控IκB激酶-β對非酒精性脂肪性肝纖維化作用的研究.pdf

1、目的:非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholicfattyliverdisease，NAFLD)疾病譜包括非酒精性單純性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎(non-alcoholicsteatohepatitis，NASH)、非酒精性脂肪性肝纖維化、肝硬化和肝細胞癌。非酒精性脂肪性肝纖維化是NASH相關肝硬化發(fā)生的必經階段，但其發(fā)病機制尚未明確，亦缺乏特異治療方法，因此尋求一種有效的藥物阻止乃至逆轉非酒精性脂肪性肝纖維化成為當前研究的熱點。

2、扶正化瘀復方是在肝纖維化的基本病機“正虛血瘀”基礎上研制成的傳統(tǒng)中藥復方，由丹參、絞股藍、桃仁、松花粉、蟲草菌絲、五味子六味中草藥組方。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，扶正化瘀復方(FuzhengHuayurecipe，F(xiàn)ZHY)可通過抑制轉化生長因子-β1(transforminggrowthfactor-β1，TGF-β1)通路相關基因的異常表達阻止非酒精性脂肪性肝纖維化的發(fā)生與進展。IκB激酶-β(inhibitorκBkinase-β，IKK

3、-β)作為核因子-κB(NuclearFactor-κB，NF-κB)上游始動信號，可促進多種轉位相關基因的表達，目前尚缺乏IKK-β在非酒精性脂肪性肝纖維化發(fā)生發(fā)展中的作用及靶向調控治療機制的研究。本研究采用高脂、膽堿-蛋氨酸缺乏(methionineandcholinedeficient，MCD)飲食建立小鼠非酒精性脂肪性肝纖維化模型，扶正化瘀復方或聯(lián)合血紅素氧合酶-1(hemeoxygenase-1，HO-1)激動劑血晶素(hem

4、in)進行干預實驗，觀察肝組織IKK-β及其調控的效應因子單核細胞趨化蛋白-1（monocytechemoattractantprotein-1，MCP-1）、基質金屬蛋白酶-2(matrixmetalloproteinase-2，MMP-2)和結締組織生長因子(connectivetissuegrowthfactor，CTGF)mRNA和蛋白的表達變化及對疾病進展的影響，明確IKK-β在非酒精性脂肪性肝纖維化發(fā)病中的作用，進一步闡明F

5、ZHY阻止非酒精性脂肪性肝纖維化的機制，為臨床有效治療NAFLD提供理論依據。
　　 方法:采用MCD飼料喂養(yǎng)健康雄性C57BL/6J小鼠8周建立非酒精性脂肪性肝纖維化模型，分別給予扶正化瘀復方、血晶素或扶正化瘀復方聯(lián)合血晶素進行干預實驗，以膽堿-蛋氨酸充足飼料設立對照組。觀察實驗動物毛發(fā)、活動情況及體重變化;肝組織切片采用蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色觀察肝組織脂肪變、炎癥活動;Masson染色觀

6、察肝臟纖維化程度;逆轉錄聚合酶鏈反應(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)檢測IKK-β、MCP-1、MMP-2及CTGFmRNA的表達情況;Westernblot和免疫組織化學染色方法檢測IKK-β、MCP-1、MMP-2及CTGF蛋白的表達情況。
　　 結果:
　　 1、實驗動物一般情況:對照組小鼠毛發(fā)有光澤，活潑好動，體重隨造模時間逐漸增加;模型組

7、毛發(fā)紊亂、無光澤，活動少，精神萎靡，體重明顯減輕;扶正化瘀復方組、血晶素組及扶正化瘀復方聯(lián)合血晶素組小鼠毛發(fā)略顯紊亂，較黯淡，精神較為呆滯，活動較少，攝食少、體重減輕。
　　 2、實驗動物肝臟解剖及病理學變化:肉眼觀察:對照組小鼠肝臟為暗紅色，明亮有光澤，質地柔軟有彈性。模型組小鼠肝臟體積明顯減小，與周圍組織有粘連，邊緣銳利，顏色淺黃，無光澤，切面油膩，質地較硬，彈性差。扶正化瘀復方組、血晶素組及扶正化瘀復方聯(lián)合血晶素組小鼠肝臟

8、體積亦減小，呈紅褐色，有光澤。光鏡下觀察:對照組小鼠肝組織結構基本完整，肝小葉結構正常，肝細胞排列成肝索，圍繞中央靜脈呈放射狀分布;模型組小鼠多數肝細胞呈現(xiàn)大泡性脂肪變，以腺泡3帶為著，小葉內可見以單核細胞、淋巴細胞為主的炎癥細胞浸潤，伴有點、灶狀肝細胞壞死，肝竇間隙變窄，可見竇周纖維化及匯管區(qū)纖維組織增生(NAS評分7～8S3～4);扶正化瘀復方組、血晶素組肝細胞脂肪變、炎癥及纖維化程度較模型組均明顯減輕(NAS評分5～6S1～2)，

9、尤以扶正化瘀復方聯(lián)合血晶素組改善最顯著(NAS評分4～5S0～1)。
　　 3、實驗動物肝組織IKK-β、MCP-1、MMP-2、CTGFmRNA和蛋白表達:模型組IKK-βmRNA和蛋白表達顯著高于對照組，應用扶正化瘀復方、血晶素或扶正化瘀復方聯(lián)合血晶素干預后，小鼠肝組織IKK-βmRNA和蛋白表達明顯降低，伴隨炎癥因子MCP-1和促纖維化因子MMP-2、CTGF的表達下調，尤以扶正化瘀復方聯(lián)合血晶素組下降最明顯。