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文檔簡介
1、本文對一株高產普魯蘭酶的產氣氣桿菌TCCC11061發(fā)酵培養(yǎng)基進行了優(yōu)化，通過單因素試驗與正交試驗相結合確定最佳培養(yǎng)基配比為(g/L)：玉米淀粉15，豆餅粉10，CH3COONH48，KeHPO4·3H2O0.5，MgSO4·7H2O0.5，KC10.5，F(xiàn)eSO4·7H2O0.05；同時對接種條件和搖床條件進行了優(yōu)化，確定搖瓶發(fā)酵條件：搖床轉速180r/mim，種齡12h，接種量3％，裝液量100mL/500mL。在優(yōu)化后的培養(yǎng)基及培
2、養(yǎng)條件下，普魯蘭酶活力達到42.14U/mL。此外，研究并確定了7L發(fā)酵罐的發(fā)酵條件，控制pH7.5左右，溶氧5％～15％，總糖濃度在0.6％，30℃發(fā)酵55h，酶活力最高可達54.64U/mL。
將TCCC11061的發(fā)酵液分別經過離心除菌體、硫酸銨分段鹽析、透析袋透析脫鹽、DEAE-Sepharose Fast Flow離子交換層析、Sephadex G-75柱層析等步驟獲得電泳純的普魯蘭酶，使用聚丙烯酰胺凝膠電泳測得
3、分子量約為42～45kDa。以普魯蘭為底物時，TCCC11061普魯蘭酶的Km為3.5×10-3g/mL。研究該菌株所產普魯蘭酶的酶學性質發(fā)現(xiàn)，最適作用pH為5.8，最適反應溫度為55℃，在pH4.5～6.5、40℃以下都較穩(wěn)定，對1mol/L H2O2具有一定的耐受性。Ca2+和Mg2+離子對該酶具有保護作用，而EDTA、異丙醇和乙醇對該酶有明顯的抑制作用。
初步建立了液體普魯蘭酶提取工藝流程，發(fā)酵液→凝聚→過濾→超濾濃
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