γδT細(xì)胞體外抑制未成熟樹突狀細(xì)胞向破骨細(xì)胞轉(zhuǎn)分化.pdf

1、目的：觀察多發(fā)性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）患者及健康志愿者外周血γδT細(xì)胞體外擴(kuò)增情況；探討γδT細(xì)胞對人外周血來源未成熟樹突狀細(xì)胞（immature dendritic cell,imDC）轉(zhuǎn)分化為破骨細(xì)胞（osteoclast cell,OC）過程的影響。
　　方法：（1）采集MM患者及健康志愿者外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMNC），應(yīng)用1μM

2、唑來膦酸（zoledronate,Zol）及100IU/ml重組人白細(xì)胞介素-2（interleukin-2,IL-2體外激活擴(kuò)增γδT細(xì)胞，培養(yǎng)第7天采用流式細(xì)胞術(shù)和細(xì)胞計(jì)數(shù)觀察γδT細(xì)胞產(chǎn)率；（2）由粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（granulocyte macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF）及白細(xì)胞介素-4（interleukin-4,IL-4）誘導(dǎo)人PBMNC轉(zhuǎn)化為imDC，培養(yǎng)至

3、第6天流式細(xì)胞術(shù)檢測CD14、CD1a和CD51/61;imDC在細(xì)胞核因子B受體活化因子配基（recep tor activator fnuclear factor B ligand,RANKL）和巨噬細(xì)胞集落刺激因子（macrophage colony-stimulating factor,M-CSF）作用下繼續(xù)培養(yǎng)誘導(dǎo)為OC；（3）免疫磁珠分選法收集第7天的人外周血γδT細(xì)胞，收集第6天的imDC，細(xì)胞共培養(yǎng)體系共培養(yǎng)γδT細(xì)胞及

4、imDC（γδT細(xì)胞數(shù)量：imDC數(shù)量=10:1），上室為γδT細(xì)胞，下室為imDC，于共培養(yǎng)7天或14天后收集下室細(xì)胞，采用以下方法了解γδT細(xì)胞對imDC轉(zhuǎn)分化為OC過程的影響：耐酒石酸酸性磷酸酶（tartrate resistant acid phosphatase,TRAP）染色觀察TRAP+多核細(xì)胞、甲苯胺藍(lán)染色觀察牙本質(zhì)片骨吸收陷窩；（4）將上述磁珠分選的γδT細(xì)胞與培養(yǎng)的imDC直接接觸共培養(yǎng)于板內(nèi)（γδT細(xì)胞數(shù)量：imD

5、C數(shù)量=10:1），觀察γδT細(xì)胞對imDC轉(zhuǎn)分化為OC過程的影響；（5）收集γδT細(xì)胞-imDC間接共培養(yǎng)組、γδT細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)組及 imDC單獨(dú)培養(yǎng)組的上清，用 ELISA檢測腫瘤壞死因子(tumo rnecros is factor-alpha,TNF-α）和I型膠原C-末端肽（type I collagen carboxy-terminal peptide,CTX-1）濃度，探討γδT細(xì)胞對imDC發(fā)揮作用的可能機(jī)制。
　

6、　結(jié)果：（1）Zol及重組人IL-2可在體外培養(yǎng)條件下大量擴(kuò)增 MM患者外周血γδT細(xì)胞，擴(kuò)增產(chǎn)率與健康志愿者無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；（2）證實(shí)由外周血誘導(dǎo)分化的imDC在RANKL和M-CSF作用下可轉(zhuǎn)分化為OC；（3）γδT細(xì)胞與imDC間接接觸共培養(yǎng)條件下，每低倍鏡視野 TR AP+多核細(xì)胞數(shù)和牙本質(zhì)骨吸收面積均顯著低于對照組，顯示OC生成減少；（4）γδT細(xì)胞與imDC直接接觸共培養(yǎng)條件下，γδT細(xì)胞亦可減少imDC誘導(dǎo)生