PPARα激動劑非諾貝特抑制高糖誘導的腎小球系膜細胞增殖及細胞外基質產生的機制探討.pdf

1、目的：觀察過氧化物酶體增殖物激活受體α(peroxisome proliferator activated receptors α，PPARα)激動劑非諾貝特對高糖誘導的腎小球系膜細胞增殖及細胞外基質（Extracellular matrix，ECM）蛋白產生的影響，初步探討其對糖尿病腎病的保護作用及可能的分子機制。
　　 方法：體外高糖培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細胞（mesangial cells，MCs），將MCs分為正常對照組（N

2、,5mmol/L葡萄糖）、高糖組（H,40mmom/L葡萄糖）、高糖+不同濃度的PPARα激動劑非諾貝特組（FN）、高糖+不同濃度PPARα抑制劑MK886組（MK），通過轉染含PPAR反應元件（PPARresponse element PPRE）的p4XPPRE-luc重組質粒，雙熒光素酶分析法檢測細胞PPARα活性的改變；RT-PCR及Western blot檢測PPARαmRNA及蛋白的表達情況；MTT法及流式細胞術檢測細胞增殖及

3、細胞周期；采用RT-PCR檢測端粒酶逆轉錄酶（telomerase reverse transcriptase，TERT）的表達；結合RT-PCR、Westernblot及免疫熒光法檢測纖維連接蛋白mRNA（fibronectin mRNA）、α-平滑肌肌動蛋白（alpha-smooth muscle actin，α-SMA）、IV型膠原（Collagen-IV，Col-IV）蛋白的表達及胞內信號蛋白P-AKT及P-ERK1/2的表達情

4、況。
　　 結果：與N組比較，H組PPARα活性改變無統(tǒng)計學意義；而合適濃度的非諾貝特干預后PPARα受體活性明顯增加，MK組的活性下降。H組MCs PPARαmRNA及蛋白表達均上調；與H組相比，F(xiàn)N各組上述表達水平顯著升高，呈濃度依耐性；MK組則表達下調，其作用在干預6h較顯著。與N組相比較，H組細胞增殖明顯增加；與H組比較，F(xiàn)N組細胞增殖被抑制，呈濃度依賴性。與N組相比，H組細胞G2/M及S期比例增加；與H組比較，F(xiàn)N組G

5、0/G1期比例增加，S期及G2/M期逐漸減少，MK組S期及G2/M比例則漸增。H組Fibronectin mRNA、α-SMA及Collagen-IV蛋白表達增加，F(xiàn)N組則明顯下調。H組P-AKT、P-ERK1/2表達增加，F(xiàn)N組其表達明顯下調。
　　 結論：非諾貝特可通過抑制高糖誘導的腎小球系膜細胞增殖及細胞外基質蛋白的表達可能對糖尿病腎病起保護作用，其作用機制可能與PPARα激活后作用于PI3K-AKT及ERK1/2胞內信號