三氧化二砷誘導SGC7901細胞凋亡及對bcl-2、cyclinD1表達的影響.pdf

1、背景及目的：
　　 三氧化二砷(Arsenic trioxide，ATO)是中藥砒霜的主要有效成分，近年來大量的研究表明三氧化二砷除了能治療血液系統(tǒng)疾病外，對包括胃癌在內(nèi)的多種惡性實體瘤也有強大的抗癌作用。胃癌是我國常見的惡性腫瘤，其對放、化療的敏感性均較低，死亡率高，晚期尚缺乏有效的治療手段，因此尋找新的治療藥物和治療手段乃當務之急。
　　 三氧化二砷可以誘導惡性腫瘤細胞凋亡進而抑制腫瘤生長從而發(fā)揮治療作用，其分子機制

2、涉及多個凋亡調(diào)控分子。細胞凋亡失常參與了腫瘤發(fā)病過程的多個環(huán)節(jié)。Bcl-2基因(B-cell lymphoma/leukemia-2 gene，B細胞淋巴瘤或白血病基因-2)，是從濾泡性淋巴瘤中分離出的一種癌基因，也是細胞凋亡抑制因子，具有抑制細胞凋亡、延長細胞壽命的功能。目前認為，Bcl-2家族中促凋亡因子和抗凋亡因子的相對表達水平至少部分決定了細胞對凋亡信號的反應性。周期素D1(cyelin D1)基因是近年提出的重要的原癌基因，其

3、蛋白產(chǎn)物在細胞周期關鍵限速點G1/S期轉(zhuǎn)換中起重要正調(diào)控作用。Cyclin D1的異常調(diào)節(jié)將導致G1期縮短，細胞提前進入S期，使細胞增殖失控從而形成腫瘤。
　　 本研究應用三氧化二砷作用于胃腺癌SGC7901細胞，觀察三氧化二砷對胃腺癌SGC7901細胞凋亡及細胞周期的影響，以及此過程中bcl-2、cyclinD1基因表達的改變，探討三氧化二砷誘導胃腺癌SGC7901細胞凋亡的機制。
　　 材料和方法：
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4、.分別應用不同濃度的三氧化二砷作用于胃腺癌SGC7901細胞，作用不同時間后采用MTT檢測法對細胞增殖活性進行檢測；采用流式細胞儀(FCM)AnnexinV/PI雙染法檢測細胞周期及細胞凋亡率；應用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測bcl-2、cyclinD1基因的轉(zhuǎn)錄水平；用免疫組織化學方法檢測三氧化二砷對胃腺癌SGC7901細胞Bcl-2、Cyclin D1蛋白表達的影響。
　　 2.統(tǒng)計學分析：實驗數(shù)據(jù)應用SPSS

5、13.0軟件分析處理，連續(xù)型變量比較采用t檢驗，多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析，分類變量比較采用卡方檢驗，相關性分析采用pearson相關分析。P<0.05作為有統(tǒng)計學意義的判定標準。
　　 結(jié)果：
　　 1.稍高濃度(≥21μmol/L)的三氧化二砷可抑制胃腺癌SGC7901細胞增殖，并有劑量和時間依賴性。
　　 2.三氧化二砷可以誘導胃腺癌SGC7901細胞凋亡，隨著三氧化二砷濃度的增高，細胞凋亡數(shù)逐漸增高

6、，1μmol/L組與對照組比較細胞凋亡數(shù)差異無顯著性(P>0.05)，而較高濃度組與對照組相比較細胞凋亡數(shù)差異有統(tǒng)計學差異(P<0.05)。
　　 3.三氧化二砷處理48h后細胞周期有了顯著的變化，G1期細胞百分比增加，S期細胞百分比下降，與對照組相比有統(tǒng)計學差異(P<0.01)。
　　 4.逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(RT-PCRl)檢測bcl-2、cyclin D1基因的轉(zhuǎn)錄水平，發(fā)現(xiàn)實驗組bcl-2、cyclin D1基

7、因的表達與對照組相比明顯減低(P<0.01)。
　　 5.用三氧化二砷處理后，胃腺癌SGC-7901細胞Bcl-2、Cyclin D1蛋白的表達都下降，且兩者之間有相關性，有統(tǒng)計學意義(r=0.948，P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.三氧化二砷可有效抑制胃腺癌SGC7901細胞增殖，誘導細胞凋亡，阻滯細胞周期，與作用劑量和作用時間呈正相關。這一過程可能與三氧化二砷抑制bcl-2、cyclin D1基因的