HBV感染者HBsAg和HBsAb同時陽性的血清學異常模式的相關研究.pdf

1、目的：
　　HBV感染呈現世界性流行，我國作為一個HBV高感染地區(qū)更應該引起重視。亞洲感染者的基因型主要以B和C型為主，HBV突變性高于其他的DNA病毒。目前實驗室常用方法學的敏感性由于HBV的基因變異的出現而面臨嚴峻的挑戰(zhàn)。臨床方面也由于Pre-S/S基因突變給乙肝患者的治療判斷及預后帶來一系列的問題。HbsAg作為HBV感染的標志特性已經存在多年，血清學檢測時表現為HBsAg和HBsAb同時存在或HBsAg陰性等情況的出現使得

2、人們對于HBV的免疫學診斷產生困惑。國內外的學者對于HBVpre-S突變對于免疫逃避和隱匿性感染的影響的結論并不相同。相關突變數據報導主要來自于日本、中國臺灣地區(qū)、韓國等東南亞地區(qū)，通常認為免疫逃避產生的原因是“a”決定簇內部的主要是G145R的突變。而在中國對于pre-S和S區(qū)基因突變研究數據不多。本研究的目的主要提供本地區(qū)HBV基因型和突變株流行病學數據，明確HBsAg和HBsAb同時陽性慢性HBV感染者的異常血清學模式可能的機制，

3、分析Pre-S/S基因突變對實驗診斷結果的影響和造成免疫逃避的原因并探討其臨床意義。
　　方法：
　　1.收集HbsA g、HbsAb同時陽性的四種臨床異常的血清學榆測結果樣本，采用DNA定量檢測方法篩選HBVDNA陽性的標本，選取HBsAg陽性HBsAb陰性的慢性乙肝患者作為對照組。
　　2.應用高效病毒核酸提取收集血清的HBVDNA。
　　3.設計引物，利用PCR擴增得到HBVpre-S/S擴增產物，HBVp

4、re-S/S基因序列利用PCR產物直接測序法得到.
　　4.進行S基因型分型，比較兩組PreS/S基因變異情況，結合臨床資料探討其臨床意義。
　　結果：
　　1.對于HBsAg和HBsAb檢測同時陽性的標本的測序分析發(fā)現這些標本中存在B基因型19例、c基因型41例，B基因型和c基因型的S區(qū)氨基酸突變率分別為10.8％和21.6％(F=24.31，P=0.046)差異有統(tǒng)計學意義.
　　2.同樣為C基因型的兩組患者

5、，實驗組s區(qū)氨基酸突變?yōu)?1.6％明顯多于對照組的氨基酸突變率3.2％(F=85.68，V=0.006)差異有統(tǒng)計學意義。
　　3.8例出現G145/K的突變，3例出現G145/A的突變，13例標本中出現pre-S13'端大片段缺失突變株與野生型共同存在。
　　4.HBVpre-S功能位點缺失突變形成免疫逃逸，造成HBsAg和HBsAb檢測同時陽性。
　　5.HBsAg和HBsAb檢測同時陽性的實驗組中AFP陽性率為3

6、8.33％(23/60)明顯高于對照組中的11.67％(7/60)(F=43.86,P=0.031)差異有統(tǒng)計學意義，且C基因型AFP陽性率43.9％(18/41)高于B基因型26.32％(5/19)，兩者比較(F=24.42，P=0.041)差異有統(tǒng)計學意義，提示HBsAg和HBsAb檢測同時陽性的病毒感染模式會增加肝癌肝硬化的發(fā)生，且C基因型肝癌發(fā)生率高于B基因型的肝癌發(fā)生率。
　　結論：
　　1.由于HBV在體內長期免

7、疫壓力下，以及目前對于HBV的患者的治療下，乙肝耐藥性明顯增加，其突變率或混合感染不同病毒株的幾率可能略有增加，導致HBsAg和HBsAb雙陽性的產生。
　　2.在HBsAg和HBsAb雙陽性的感染者中，HBeAg可以陽性或陰性，在本研究的對照組中也出現了部分S區(qū)點突變的情況，可能的原因為擴增過程中出現的突變。
　　3.HBsAg(+)HBsAb(+)并伴有HBeAg(+)的血清中HBV DNA的陽性率明顯增高。
　　

8、4.HBsAg和HBsAb同時陽性的現象與PreS/S區(qū)基因突變具有明顯的相關性，且C基因型的突變率高于B基因型的突變率。
　　5.HBsAg和HBsAb同時陽性的現象與PreS/S區(qū)基因突變具有一定的相關性，HBV DNA陽性的患者中出現的HBsAb不具有保護作用。
　　6.Pre-S/S基因突變及缺失可導致HbsAg血清學漏檢，造成臨床診斷失誤。
　　7.PreS/S區(qū)基因突變會提高肝癌及肝硬化的發(fā)生率，且C基因型