低分子肝素抗炎性凝血效應對膿毒癥大鼠急性肺損傷的保護作用.pdf

1、[目的]
　　 1.動態(tài)觀察盲腸結(jié)扎穿孔(cecal ligation puncture，CLP)膿毒癥模型大鼠肺組織高遷移率族蛋白B1(high mobility group boxl portein，HMGB1)mRNA和蛋白表達水平，研究低分子肝素對肺組織HMGB1基因和蛋白表達的影響，探討低分子肝素對膿毒癥大鼠急性肺損傷的保護作用及其可能機制，為膿毒癥患者器官功能保護提供新的理論依據(jù)
　　 2.觀察低分子肝素對膿

2、毒癥大鼠血漿TNF-α及IL-6的含量的影響，探討低分子肝素對膿毒癥早晚期炎癥釋放的作用。
　　 [方法]
　　 144只SPF級雄性成年SD大鼠(體重200～220g)被隨機分為假手術組(48只)、盲腸結(jié)扎穿孔術(CLP)后常規(guī)治療組(48只)及常規(guī)加低分子肝素治療組(48只)，分別施以假手術(A組)或CLP(B組和C組)。A組開腹后輕拉盲腸后將其回納腹腔，逐層縫合腹壁，其余各組均采用CLP術制作大鼠膿毒癥模型術后立即

3、腹腔注射生理鹽水(NS)2ml+頭孢曲松(30mg/kg)(A、B組)；生理鹽水(NS)2 ml+頭孢曲松(30mg/kg)+低分子肝素(150 U/kg)(C組)。以術后3、6、12、18、24、48小時為觀察點，觀察各組大鼠術后活動、進食、豎毛、腹瀉、眼球凹陷、呼吸等情況；于各觀察點每組隨機處死大鼠5只，每組留18只不殺用以觀察5天生存率。采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術測肺組織HMGB-1mRNA的表達；采用Weste

4、rn blot法檢測肺組織HMGB-1蛋白的表達;采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血漿TNF-α及IL-6的含量;用分光光度比色法檢測肺組織髓過氧化物酶(myeloperoxidese,MPO)；熱干法稱取肺組織濕重/干重比值(Wetweight/Dry weight)；并在活殺前行膿毒癥大鼠評分。觀察低分子肝素對膿毒癥大鼠嚴重程度評分、生存時間、血漿TNF-α及IL-6的含量、肺組織HMGBI mRNA與蛋白表達、MPO活性以及WW/DW比值的

5、影響。
　　 [結(jié)果]
　　 1.A組各時間點膿毒癥評分差異無顯著統(tǒng)計學意義，B、C組膿毒癥評分較A組同期水平明顯升高(P＜0.01)，從6h開始增高，24h達到高峰并維持至48h，48h評分仍顯著高于組內(nèi)6h(P＜0.05)；C組各時間點評分均顯著低于B組同期水平(P＜0.05)。A、B、C組半數(shù)生存時間依次為120h、20.4h、28h；A、B、C兩兩組間差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2.A組各

6、時間點大鼠HMGBlmRNA和HMGB1蛋白均有微量表達，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。B、C組HMGB1mRNA和HMGB1蛋白從6h開始表達增多，以12～24h為顯著，48h開始下降但仍高于A組。C組同期水平較B組低(P＜0.05)，但仍比A組高且有顯著性差異(P＜0.05)。
　　 3.A組大鼠血漿TNF-α水平在術后各時間點差異無顯著性，B組大鼠血漿TNF-α水平于術后6h達到峰值，12h開始明顯下降，24 h逐漸恢

7、復至3h水平。C組各時間點血漿TNF-α水平低于B組(P＜0.05)，但仍顯著高于A組(P＜0.05)。A組大鼠血漿IL-6水平在術后各時間點差異無顯著性，B組大鼠血漿IL-6水平于術后3h達到峰值，18h開始明顯下降，24 h逐漸恢復至3h水平。C組各時間點血漿IL-6水平低于B組(P＜0.05)，但仍顯著高于A組(P＜0.05)。
　　 4.A組各時間點MPO活性無明顯差異，B組CLP后3小時MPO活性開始升高，24h達峰值

8、，48h開始有所回落，但與A組同期水平差異仍有顯著性(P＜0.05)，C組較B組同期水平低(P＜0.05)，但較A組顯著升高(P＜0.05)。
　　 5.A組肺組織WW/DW比值較B、C低，差異有顯著性(P＜0.05)，C組比值介于A組與B組之間，各組組間差異具顯著性(P＜0.05)。
　　 6.光鏡下B組肺組織可見明顯急性肺損傷表現(xiàn)：充血、水腫、炎癥細胞浸潤；C組較B組病理損傷明顯減輕，且肺損傷病理評分明顯降低(P＜0

9、.05)。
　　 [結(jié)論]
　　 1.低分子肝素能夠抑制CLP引起的膿毒癥過程中的早晚期炎癥介質(zhì)釋放。
　　 2.低分子肝素能夠顯著抑制膿毒癥大鼠肺組織HMGB1蛋白及mRNA水平表達；通過抑制肺組織HMGB1，下調(diào)膿毒癥大鼠肺組織MOP活性，減輕肺組織PMN浸潤，減緩CLP誘導的肺損傷程度，提高膿毒癥大鼠的生存率。
　　 3.低分子肝素對膿毒癥引起的肺損傷的保護作用可能是通過其抗炎性凝血效應對凝血—炎癥