中國北方漢族人群FGB基因與冠心病的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、背景：心肌梗死(Myocardial infarction，MI)是世界范圍內(nèi)最主要的死亡原因之一，約90％的心肌梗死是由動脈粥樣斑塊破裂并繼發(fā)血栓形成導致冠狀動脈急性阻塞所引起的。動脈血栓形成是MI病理過程中最主要的致病環(huán)節(jié)之一。纖維蛋白原是一種急性期蛋白，它由肝臟合成。當機體處于感染狀態(tài)時，血漿中的纖維蛋白原水平會顯著增高。纖維蛋白原作為血栓形成過程中凝血作用激活的最后一個靶點，通過聚集血小板和促進纖維斑塊的形成，在血栓形成和延展過

2、程中起到十分關(guān)鍵的作用，在歐美及日本等國家所進行的流行病學研究也已證實血漿纖維蛋白原水平與纖維蛋白原基因變異均和MI相關(guān)。由于纖維蛋白原β鏈(Fibrinogen β-chain)的合成是纖維蛋白原合成的限速步驟，因此，纖維蛋白原β鏈(Fibrinogen β-chain，F(xiàn)GB)基因變異被科學家們大量關(guān)注。既往的研究中已發(fā)現(xiàn)FGB基因-455G/A、-148C/T等多態(tài)與MI相關(guān)，但這種關(guān)聯(lián)也可能是這些位點與功能性多態(tài)連鎖不平衡所造成

3、的。因此，我們考慮采用候選基因途徑基因組掃描策略，系統(tǒng)篩查中國北方漢族人群FGB基因編碼區(qū)和側(cè)翼序列，識別所有多態(tài)位點，并進一步在病例-對照研究中探討潛在的功能多態(tài)位點與MI的關(guān)系。 材料和方法：選取1997年10月至2000年9月期間阜外心血管病醫(yī)院病房收治的北京地區(qū)漢族急性MI后存活的患者509例；選擇年齡、性別與病例匹配的北京社區(qū)人群507例作為對照組。對每一個參加者均詳細填寫調(diào)查表，包括疾病個人史、家族史、吸煙與飲酒史和

4、藥物使用情況，并測量血壓、身高、體重、腰圍及臀圍等，計算體重指數(shù)和腰臀比值，測定脂質(zhì)等生化指標。為研究FGB基因序列中是否存在未知的功能性多態(tài)位點，我們先在病例人群中隨機選取48例樣本，利用基因組DNA直接測序篩查出基因編碼區(qū)及部分調(diào)節(jié)區(qū)的全部序列變異；然后根據(jù)既往研究熱點及測序所獲得結(jié)果，分別在啟動子區(qū)、編碼區(qū)及3’側(cè)翼序列各選擇1個頻率大于5％的多態(tài)位點，在全部個體中應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片斷長度多態(tài)性分析(PCR-RFLP)方法

5、進行基因型鑒定。方差分析及χ2檢驗用于單變量分析，多元非條件Logistic回歸分析用于檢驗多態(tài)位點與疾病的獨立關(guān)聯(lián)及與環(huán)境因素的交互作用。用2LD程序計算連鎖不平衡系數(shù)，EH程序估計單體型頻率，Haplo.score程序檢驗單體型與疾病的獨立關(guān)聯(lián)，Haplo.glm程序檢驗單體型和環(huán)境因素的交互作用。結(jié)果：1．我們在FGB基因5.7 kb的測序范圍內(nèi)共發(fā)現(xiàn)18個多態(tài)位點，均為單核苷酸多態(tài)(SNP)。其中有6個SNP為首次報道，它們是位

6、于內(nèi)含子4中的5092G/A、內(nèi)含子6中的6493T/C和6401G/A、編碼區(qū)的3501G/A(Cys111Tyr)、6264A/T(Asn309Tyr)和位于3’側(cè)翼序列的8588G/A，但后三個多態(tài)在我們的研究人群中少見等位基因頻率較低。2．研究最多的啟動子區(qū)多態(tài)-455G/A和R448K等在國人中的頻率和高加索人群相似(均≈20％)。3．基因內(nèi)部常見的多態(tài)間存在緊密連鎖不平衡。4．單變量分析提示在顯性、隱性及加性三種模式下，-4

7、55G/A、R448K和8558C/G三個多態(tài)均與MI關(guān)聯(lián)。但調(diào)整了其它傳統(tǒng)的心血管病危險因素后，只有R448K在顯性模型下(RK+KK:RR，OR=0.71，P=0.026)及8558C/G在隱性模型下(GG:GC+CC，OR=0.28，P=0.046)仍然與MI保持顯著關(guān)聯(lián)。5．連鎖不平衡和單體型分析顯示，-455G/A、R448K和8558C/G三個多態(tài)間存在幾乎完全的連鎖不平衡，并主要組成兩種相對立的單體型-455G-448R-