番茄黑環(huán)病毒和建蘭花葉病毒檢測(cè)方法的研究.pdf

1、番茄黑環(huán)病毒(Tomato black ring nepovirus， TBRV)和建蘭花葉病毒(Cymbidium mosaic virus，CymMV)是我國(guó)進(jìn)境植物檢疫法規(guī)中明確規(guī)定的危險(xiǎn)性有害生物。目前，國(guó)內(nèi)在兩種病毒的檢疫檢測(cè)方法如生物學(xué)檢測(cè)、電鏡檢測(cè)、血清學(xué)檢測(cè)、分子生物學(xué)以及分子檢測(cè)方法的靈敏度的報(bào)道相對(duì)比較少。本文就兩種病毒的檢疫檢測(cè)方法進(jìn)行研究，取得了以下的成果。 1采用番茄黑環(huán)病毒(TBRV)的五個(gè)株系，對(duì)番

2、茄黑環(huán)病毒的生物學(xué)、血清學(xué)、電鏡觀察、分子生物學(xué)以及分子生物學(xué)靈敏度的進(jìn)行研究。研究結(jié)果表明：通過(guò)汁液摩擦接種的方法接種幾種鑒別寄主，篩選出檢測(cè)TBRV的一套鑒別寄主。 2建立了TBRV酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)方法；首次建立了TBRV的免疫電鏡觀察方法，在血清學(xué)檢測(cè)陽(yáng)性的樣品中可清楚觀察到病毒粒子，病毒粒子球形。 3根據(jù)國(guó)際基因庫(kù)中已公布的TBRV的外殼蛋白基因和運(yùn)動(dòng)蛋白基因，設(shè)計(jì)了4對(duì)特異性引物，首次建立了TBRV的反轉(zhuǎn)錄聚合

3、酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和免疫捕獲反轉(zhuǎn)錄(IC-RT-PCR)檢測(cè)方法；選取了TBRV的3個(gè)分離物的保守區(qū)段，設(shè)計(jì)了特異性引物和MGB探針，建立了TBRV的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法；采用質(zhì)粒稀釋梯度的方法來(lái)進(jìn)行TBRV的分子生物學(xué)的靈敏度檢測(cè)，靈敏度檢測(cè)結(jié)果表明：能檢測(cè)TBRV最低病毒量為：10<'-8>ug/ml水平，與普通的PCR相比，檢測(cè)的靈敏度提高了100倍。 4根據(jù)已經(jīng)公布的CymMV的外殼蛋白的序列設(shè)計(jì)了兩對(duì)引物，采