沙眼衣原體培養(yǎng)陽性率提高及臨床株熱休克蛋白60的轉錄隨傳代的變化.pdf

1、沙眼衣原體(Chlamydiatrachomatis，Ct)感染是目前發(fā)達最常見的性病病原體，可引起尿道炎、宮頸炎、子宮內膜炎、附睪炎、前列腺炎、不孕癥多種疾病，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢，已經成為一個危害極大的公共健康問題。沙眼衣原體檢測的金標準目前仍然是細胞培養(yǎng)。但是細胞培養(yǎng)并未在臨床工作中廣泛采用。而且，臨床株的培養(yǎng)是體外藥物敏感試驗的基礎。因此，提高沙眼衣原體細胞培養(yǎng)檢出的陽性率顯得尤為重要。另外，導致沙眼衣原體感染治療失敗的一個重

2、要原因是沙眼衣原體的持續(xù)感染，持續(xù)感染時碘染不能看到典型的包涵體且沙眼衣原體熱休克蛋白60含量增加。
　　目的：1、探討聚乙二醇(PEG)促進沙眼衣原體D-UW-5/Cx型、E-UW-5/Cx型標準株生長的最適濃度及聚乙二醇對沙眼衣原體D-UW-5/Cx型、E-UW-5/Cx型標準株4種常用抗菌藥物阿奇霉素、米諾環(huán)素、莫西沙星、多西環(huán)素體外藥物敏感性和31例臨床標本包涵體數量的影響。
　　2、探討E型標準株和40例經細胞培養(yǎng)

3、成功的沙眼衣原體E型臨床株隨著傳代次數的增加其熱休克蛋白60(HSP60)含量的改變及不同治療效果患者首次傳代碘染出現包涵體情況的差別。
　　方法：在沙眼衣原體D、E型菌株接種于致密單層的McCoy細胞時，加入含有不同濃度PEG的細胞培養(yǎng)液，離心后在孵箱中靜置2h后換成衣原體感染液，48h后固定，碘染計數包涵體數量。將經過0.7％PEG處理過的沙眼衣原體接種于細胞培養(yǎng)板的McCoy細胞，使McCoy細胞感染率達90％以上后進行藥敏

4、實驗。采用微量稀釋法測定體外4種抗菌藥物對沙眼衣原體的作用并在細胞培養(yǎng)液中加入0.7％PEG，將31例衣原體細胞培養(yǎng)陽性且基因分型為D、E型的臨床標本加入或者不加入0.7％PEG接種于致密單層的McCoy細胞后計數第一代全孔包涵體數量。
　　將經McCoy細胞培養(yǎng)法檢測出的40例E型沙眼衣原體臨床株，通過RT-PCR方法檢測首次傳代，二次傳代，三次傳代和四次傳代的CHSP60含量，將40例E型沙眼衣原體臨床株分為首次傳代出現和未出

5、現包涵體兩組，通過x2檢驗不同治療效果患者首次傳代碘染出現包涵體情況的差別。
　　結果：0.7％PEG能使沙眼衣原體E型標準株包涵體數量提高3.44倍，D型標準株包涵體數量提高3.56倍，為促進沙眼衣原體D、E型生長的最適濃度。在體外，PEG處理過的沙眼衣原體D、E型標準株的阿奇霉素、莫西沙星、多西環(huán)素、米諾環(huán)素的最低抑菌濃度與未經PEG處理的沙眼衣原體標準株藥敏結果一致，0.7％PEG可以顯著增加沙眼衣原體D、E型臨床標本傳代產

6、生的包涵體數量。經細胞培養(yǎng)成功的E型沙眼衣原體臨床株傳代未出現包涵體時其CHSP60含量較出現包涵體時高(P<0.05)。首次傳代出現包涵體與否其對應患者治療效果有差別，治療失敗患者80％首次傳代未出現包涵體，一個療程治療后轉陰患者70％在首次傳代出現包涵體。
　　結論：1、0.7％的PEG可以顯著促進沙眼衣原體D型、E型的生長并對沙眼衣原體D型、E型標準株藥敏結果無明顯影響，且可以進一步提高臨床標本檢測的敏感性。
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