鼠干細胞（胚胎、間充質(zhì)）體外定向分化為心肌細胞及心臟移植的動物試驗研究.pdf

1、第一部分 小鼠胚胎干細胞體外定向分化心肌細胞的實驗研究;眾所周知,心肌細胞屬永久細胞,既終末分化細胞,因此,心肌細胞損傷后再生問題一直是現(xiàn)代醫(yī)學的重大難題,該實驗旨在建立小鼠胚胎干細胞體外定向誘導分化為心肌細胞的模型,摸索小鼠胚胎干細胞體外培養(yǎng)和擴增的適宜環(huán)境和條件,探討小鼠胚胎干細胞體外定向分化為心肌細胞的誘導條件及影響因素.盡管目前關于人類胚胎干細胞的培養(yǎng)和誘導分化工作尚在初級階段,小鼠胚胎干細胞的研究有助于對人類胚胎干細胞理解和

2、認識,促進對人類心肌細胞的分化與再生的認識和研究,并最終為臨床心肌損害的治療開拓了一條新的思路,具有特殊的科學意義和臨床應用前景.1.絲裂霉素Cμg10/ml的濃度1小時對于小鼠胎兒成纖維細胞飼養(yǎng)層的制備具有較好的效果.2.小鼠胚胎干細胞在小鼠原代胎兒成纖維細胞制備的飼養(yǎng)層上,用加入LIF1000U/ml的胚胎干細胞培養(yǎng)基培養(yǎng),既能實現(xiàn)胚胎性干細胞體外擴增,又能最大限度抑制干細胞分化.3.加入合適的誘導劑;二甲基亞風(DMSO dime

3、thyl sulfoxide)和維甲酸(RA retinoic acid),ES細胞體外經(jīng)RA、DMSO的定向誘導分化為具有自律性跳動的心肌細胞團.4.條件心肌細胞誘導分化培養(yǎng)基能同樣促進ES細胞向心肌細胞的定向分化,由此推論:新生鼠心臟中存在一種能促進ES向心肌分化和生長的物質(zhì)或細胞因子,既促心肌細胞分化生長因子.5.細胞免疫組化鑒定:部分小鼠胚胎干細胞經(jīng)細胞免疫組化鑒定證實分化為心肌細胞,肌球蛋白、肌動蛋白及心肌特異性肌鈣蛋白在分化

4、的心肌細胞中兩組有陽性表達,對照組優(yōu)于實驗組光鏡下呈棕黃色顆粒.第二、三部分 大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞體外定向分化為心肌細胞及心肌移植的動物實驗研究;該實驗從大鼠骨髓分離、培養(yǎng)、擴增MSCs,并在體外向心肌細胞誘導,旨在建立大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞體外定向分化為心肌細胞的實驗模型,探討MSCs體外定向誘導分化為心肌細胞的誘導條件和影響因素,通過MSCs心肌移植的動物試驗研究,初步了解MSCs細胞在移植后的存活、增殖狀態(tài).有助于人類骨髓間充質(zhì)干

5、細胞向心肌細胞定向分化的了解和認識.并最終為臨床心肌損害的治療開辟一條嶄新的途徑.1.從骨髓分離、培養(yǎng)單個核細胞呈貼壁生長,成纖維細胞樣及多型性外觀.2.MSCs具有多向分化潛能,體外5-氮胞苷孵育24小時,可被定向誘導分化為心肌形態(tài)的細胞.細胞免疫組化檢測:肌球蛋白、肌動蛋白及心肌特異性肌鈣蛋白在分化的心肌細胞中有棕黃色顆粒陽性表達.3.骨髓間充質(zhì)干細胞條件誘導分化培養(yǎng)基能促進MSCs細胞向心肌細胞的定向分化.由此推論:新生鼠心臟中存