重組人血管內皮抑制素對慢性阻塞性肺疾病肺血管重塑的影響.pdf

1、目的:研究慢性阻塞性肺疾病( chronic obstructive pulmonary disease,COPD)大鼠模型發(fā)病過程中,血管內皮生長因子( Vascular endothelial growth factor,VEGF)表達水平的動態(tài)變化及其與肺血流動力學相關指標和肺血管重塑情況的關系,同時探討特異性內源性血管生成抑制因子-重組人血管內皮抑制素(Endostar)對慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺組織中VEGF表達的影響及其干

2、預后 COPD大鼠模型肺血流動力學相關指標和肺血管重塑情況的變化,從而了解VEGF在慢性阻塞性肺疾病發(fā)病過程中的作用及重組人血管內皮抑制素對慢性阻塞性肺疾病肺血管重塑的影響,為慢性阻塞性肺疾病的治療提供新的思路。
　　方法:實驗分為兩部分。第一部分檢測慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型發(fā)病過程中,血管內皮生長因子( Vascular endothelial growth factor,VEGF)表達水平的動態(tài)變化及其與肺血流動力

3、學相關指標和肺血管重塑情況的關系。實驗采用煙霧暴露疊加低氧復制COPD大鼠模型(共分四組,每組隨機分配雄性SD大鼠8只:正常對照組(A):第1、14天氣道內注入生理鹽水,4周后檢測;慢支組(B):第1、14天經(jīng)氣道內注入脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),200μg/次,4周后檢測;COPD組(C):第1、14天氣道內注入LPS,200μg/次,香煙煙霧暴露1h/天,共4周;COPD并低氧組(D):第1、14天氣道內

4、注入LPS,200μg/次,香煙煙霧暴露1h/天,,共6周,實驗的最后兩周同時給予疊加18％低氧8h/天)。
　　第二部分檢測特異性內源性血管生成抑制因子-重組人血管內皮抑制素(Endostar)對慢性阻塞性肺疾病大鼠模型肺組織中 VEGF mRNA和蛋白表達的影響及其干預后COPD大鼠模型肺血流動力學相關指標和肺血管重塑情況的變化。(共分四組,每組隨機分配雄性SD大鼠8只:Endostar干預組為:A1(空白對照組)、B1(慢支

5、干預組)、C1(COPD干預組)、D1(COPD并低氧干預組)。動物模型制作同各對應組,從第3周起給各藥物干預組腹腔內注射Endostar,劑量7.5mg.m2-1.d-1(1.25mg.Kg-1)。A1組從第3周起腹腔內注射同Endostar劑量相同的生理鹽水。
　　各組動物模型造模完成后均檢測以下指標:測定各組大鼠氣道阻力及肺血流動力學指標:右心室收縮壓( right ventricular systolic pressure

6、,RVSP)、肺動脈平均壓(mean pulmonary arterial pressure, mPAP)、右心室肥厚指數(shù)(the right ventricular hypertrophy index, RV/LV+S)。HE染色觀察肺組織病理改變,VG+維多利亞藍特殊染色檢測肺血管重塑指標:肺小動脈血管壁厚度與血管外徑比(WT%)、血管壁面積與血管總面積比(WA%)。免疫組化法檢測各組肺組織中VEGF的表達, ELISA、RT-PC

7、R分別檢測各組肺泡灌洗液(BALF)及血清VEGF的表達情況及肺組織勻漿中VEGF mRNA表達情況。Western blot檢測肺組織VEGF蛋白表達情況。分析VEGF的表達情況與肺血流動力學指標及肺血管重塑指標的相關性。
　　結果:1.氣道阻力及肺血流動力學指標(mPAP、RVSP、RVHI):與A組相比,B組氣道阻力及各項肺血流動力學指標均較 A組無明顯差異(P﹥0.05);而C、D組上述指標均較A組明顯增高(P<0.05)

8、。使用重組人血管內皮抑制素(Endostar)干預后, B1組氣道阻力及各項肺血流動力學指標較對應的B組無明顯差異(P﹥0.05),而 C1、D1組上述指標均對應的 C、D組明顯下降(P<0.05)。以生理鹽水做空白對照的A1組上述指標較對應的A組無明顯差異(P﹥0.05)。
　　2.肺血管重塑指標(WT%、WA%):與A組相比,B組肺血管重塑指標均較 A組無明顯差異(P﹥0.05);而 C、D組上述指標均較 A組明顯增高(P<0

9、.05)。使用重組人血管內皮抑制素(Endostar)干預后, B1組肺血管重塑指標較對應的B組無明顯差異(P﹥0.05),而 C1、D1組上述指標均對應的C、D組明顯下降(P<0.05)。以生理鹽水做空白對照的 A1組上述指標較對應的A組無明顯差異(P﹥0.05)。
　　3.血管內皮生長因子(VEGF)的表達情況:與A組相比,B組VEGF mRNA及蛋白表達較A組升高(P<0.05),而此組VEGF在BALF及血清中的濃度及VE

10、GF在肺血管的表達量較A組無明顯差異(P﹥0.05)。C、D組VEGF的表達,包括其mRNA、蛋白、其在BALF中的濃度及在肺血管的表達量均較A組明顯增高(P<0.05);但C組VEGF在血清中濃度較A組無明顯差異(P﹥0.05)。使用重組人血管內皮抑制素(Endostar)干預后, B1組VEGF mRNA及其在血清中的濃度較對應的B組下降(P<0.05),而VEGF蛋白表達、其在BALF中的濃度及在肺血管的表達量均較對應的B組無明顯

11、差異(P﹥0.05)。C1、D1組上述各項指標均對應的C、D組明顯下降(P<0.05)。以生理鹽水做空白對照的A1組上述指標較對應的A組無明顯差異(P﹥0.05)。
　　4.VEGF的表達情況與肺血流動力學、肺血管重塑指標的相關性分析:VEGF的表達量與肺血流動力學指標(mPAP、RVSP)及肺血管重塑指標(WT%、WA%)成正相關;使用重組人血管內皮抑制素干預后,VEGF的表達量下降,肺血流動力學、肺血管重塑指標均相應好轉。

12、r>　　結論:①在COPD發(fā)展的各個階段中,早期已經(jīng)出現(xiàn)肺血管重塑,隨著病情進展,肺血管重塑逐漸加重,并出現(xiàn)明顯肺血流動力學異常。肺血管重塑的程度與COPD病情嚴重情況密切相關。②VEGF參與了COPD病情發(fā)展的全過程,并隨著COPD病情的加重,VEGF表達逐漸增高。其可能通過影響肺血管重塑促進COPD病程進展。③重組人血管內皮抑制素可以通過抑制內源性VEGF的生成、下調VEGF的表達,起到改善肺血管重塑程度,減輕肺血流動力學的異常,減