樂復能在小鼠L929細胞中的抗病毒活性測定.pdf

1、目的:檢驗樂復能是否具有種間交叉生物活性;測定樂復能在VSV感染的小鼠成纖維細胞系L929中的抗病毒活性;探討其進一步進行臨床前的人類疾病小鼠模型研究的可行性。
　　方法:培養(yǎng)小鼠成纖維細胞系L929，將其制備成細胞懸液，接種于96孔板中置溫箱中過夜培養(yǎng)。以不同的濃度起始，連續(xù)對倍稀釋樂復能和重組小鼠干擾素α1(MuIFN-α1)，并依次加入96孔板的培養(yǎng)細胞中，設置正常細胞對照孔，繼續(xù)培養(yǎng)24小時。棄培養(yǎng)液后，在樂復能組、MuI

2、FN-α1組添加含有VSV病毒的完全培養(yǎng)基(MOI:0.1)，并設置正常細胞對照組和病毒對照組，連續(xù)培養(yǎng)36小時。吸出細胞培養(yǎng)液，0.85％ NaCl漂洗后拍干，添加細胞染色液室溫下染色2小時。自來水漂凈染色液，室溫下完全干燥后，每孔加入2-甲氧基乙醇(2-methoxyethanol)，靜置45分鐘脫色，酶標儀檢測各細胞孔的吸光值。實驗重復三次，結果取平均值，并計算保護率。以藥物濃度的對數(shù)值為橫軸，保護率為縱軸分別繪制樂復能和MuIF

3、N-α1在L929-VSV系統(tǒng)中的回歸分析圖，并通過線性回歸方法計算兩種藥物的50％最大效應濃度(EC50)。
　　結果:①樂復能組和MuIFN-α1組細胞的OD550值均明顯升高。計算兩組藥物對小鼠L929細胞的保護率，均隨著藥物濃度的增高而增大，兩者呈正相關（樂復能:r=0.972，p＜0.001; MuIFN-α1:r=0.950，p＜0.001)。通過藥物濃度和細胞保護率相關曲線發(fā)現(xiàn)，相同濃度下，MuIFN-α1在小鼠L9

4、29細胞中的對細胞的保護率較樂復能高，即抗病毒活性更明顯。②通過線性回歸的方法計算出樂復能和MuIFN-α1的EC50值分別為:170.752pg和38.810pg。由此推算樂復能在L929-VSV系統(tǒng)中抗病毒活性為6.32×106IU/mg。證實樂復能在VSV病毒感染的小鼠L929細胞中具有良好的抗病毒活性，提示其具有較強的種間交叉作用。
　　結論:①樂復能和MuIFN-α1均對感染VSV病毒的小鼠L929細胞具有保護作用，且保