4-ANI對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞株體外放射增敏作用及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：研究4-氨基-1，8-萘二胺(4-ANI)對(duì)人肝癌 HepG2細(xì)胞株體外的放射增敏作用并探討其可能存在的周期作用機(jī)制。
　　方法：使用DMEM體外培養(yǎng)人肝癌HepG2細(xì)胞株，采用CCK-8試劑盒測(cè)定不同濃度4-ANI（0、2.5、5、7.5、10、20、30μM）作用人肝癌HepG2細(xì)胞株12h、24h、48h后的增殖情況，繪制細(xì)胞存活率曲線(xiàn)，選用較低細(xì)胞毒性藥物濃度進(jìn)行后續(xù)增敏實(shí)驗(yàn)。通過(guò)細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)，分別觀(guān)察10umm

2、ol/L、20ummol/L4-ANI濃度組對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞株放療敏感性的影響，通過(guò)多靶單擊模型和線(xiàn)性二次模型擬合曲線(xiàn)計(jì)算其相關(guān)的生物學(xué)參數(shù)。采用BD FACSCALIB檢測(cè)不同劑量放射后HepG2細(xì)胞周期分布變化，檢測(cè)不同濃度4-ANI對(duì)放射后不同時(shí)間的HepG2細(xì)胞周期的影響。
　　結(jié)果：體外增殖實(shí)驗(yàn)顯示總體上實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)的4-ANI對(duì)HepG2細(xì)胞無(wú)明顯藥物毒性，藥物作用24h后，細(xì)胞未出現(xiàn)明顯抑制，且與對(duì)照組相比，

3、20uM組和30uM組反而有促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用；藥物作用48h后，存活曲線(xiàn)整體呈下降趨勢(shì)，但均不低于80％；且不同濃度組在12、24、48h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)的存活率均數(shù)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，均有P<0.001。細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)證實(shí)，4-ANI對(duì)HepG2細(xì)胞有明顯的放射增敏作用，并且放射增敏作用與4-ANI濃度呈正相關(guān)性。10μM、20μM4-ANI處理組的細(xì)胞放射增敏比SERD37分別為1.13和1.30；SERD10分別為1.42和1.88。B

4、D FCM檢測(cè)結(jié)果顯示放射可顯著引起HepG2細(xì)胞的G2/M期阻滯，且阻滯程度與放射劑量呈正相關(guān)性趨勢(shì)；4-ANI可以降低放射后引起的HepG2細(xì)胞的G2期阻滯，且4-ANI消除G2期阻滯的能力與濃度呈正相關(guān)性；同時(shí)FCM檢測(cè)發(fā)現(xiàn)單純藥物組的HepG2細(xì)胞的G2期和S期比例有所升高；4-ANI對(duì)放射后HepG2細(xì)胞周期的影響并無(wú)時(shí)間連續(xù)相關(guān)性，僅在前24h表現(xiàn)出明顯的去除G2期阻滯作用。以上結(jié)果經(jīng)單因素方差分析采用Holm-Sidak