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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
通過(guò)干擾RNA使肝癌細(xì)胞HepG2及SMCC-7721中ROCK2基因的表達(dá)下調(diào),探討ROCK2對(duì)IFITM1的調(diào)控及對(duì)肝癌細(xì)胞增殖的影響。
方法:
1、選取HepG2、SMCC-7721、Huh7三株肝癌細(xì)胞及正常肝細(xì)胞HL7702,分別檢測(cè)其ROCK2的mRNA及蛋白表達(dá)。
2、將ROCK2的siRNA片段轉(zhuǎn)染進(jìn)肝癌細(xì)胞株HepG2和SMCC-7721中,然后檢測(cè)ROCK2蛋白和mRN
2、A水平的變化。
3、將上述細(xì)胞分成:control,siRNA(-),ROCK2-siRNA三組,檢測(cè)IFITM1的蛋白表達(dá)和mRNA水平變化。
4、通過(guò)干擾ROCK2后用CCK8、EDU檢測(cè)細(xì)胞的增殖變化。
5、穩(wěn)定低表達(dá)ROCK2中干擾IFITM1后觀察肝癌細(xì)胞的增殖的變化。
結(jié)果:
1、ROCK2在肝癌細(xì)胞中mRNA及蛋白水平呈現(xiàn)相對(duì)高表達(dá)狀態(tài)。
2、將肝癌細(xì)胞內(nèi)的ROC
3、K2基因下調(diào)后,其mRNA和蛋白的表達(dá)均下降。
3、Western blot及實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示ROCK2-siRNA組 IFITM1蛋白表達(dá)和mRNA明顯升高。
4、ROCK2-siRNA組肝癌細(xì)胞增值受到明顯抑制。
5、穩(wěn)定下調(diào)ROCK2的同時(shí)干擾IFITM1后肝癌細(xì)胞的增殖較單獨(dú)干擾ROCK2組有所恢復(fù)。
結(jié)論:
下調(diào)ROCK2基因表達(dá)后IFITM1表達(dá)水平明顯升高,使肝癌
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