HMGB1-TLR-NF-κB信號途徑在狼瘡性腎炎小鼠腎組織中的表達及意義.pdf

1、目的:系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一極常見的自身免疫性疾病,狼瘡性腎炎(Lupus nephritis,LN)是本病致殘、致死的主要原因。雖然SLE的發(fā)病機制尚未完全明確,但公認淋巴細胞功能異常和細胞因子分泌失衡所致機體免疫功能紊亂是其發(fā)病機制的核心,新近發(fā)現(xiàn)的細胞因子高遷移率族蛋白1(high mobility group proteinboxl,HMGB1)在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中的

2、作用也倍受關注。作為一種重要的晚期炎癥介質(zhì),HMGB1參與了類風濕關節(jié)炎、紅斑狼瘡、干燥綜合癥等多種自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展[2-3]。我們前期的實驗通過研究HMGB1在狼瘡性腎炎患者外周血的水平以及HMGB1對人系膜細胞增殖的影響,發(fā)現(xiàn)HMGB1是狼瘡腎炎發(fā)病過程的重要的細胞因子之一,與系膜細胞增生有關[8]。但其在狼瘡性腎炎腎組織中的表達變化及可能的作用機制目前尚缺乏深入研究,因此本實驗采用BXSB小鼠模型為研究對象,通過觀察HM

3、GB1及其Toll樣受體(Toll like receptor,TLR)及NF-κB在腎組織中的表達變化,并分析它們之間的相關性,初步探討HMGB1/TLR/NF-κB途徑在狼瘡性腎炎發(fā)病中的信號調(diào)控作用。
　　 方法:
　　 選取11周齡、體重18～22g的雄性BXSB小鼠(狼瘡性腎炎模型組)和C57BL/6小鼠(正常對照組)為研究對象,于16周齡時通過眼眶內(nèi)眥靜脈取血,膀胱穿刺取尿后處死動物并取材,ELISA法檢測小

4、鼠血清中HMGB1蛋白的水平;PAS和透射電鏡觀察腎組織形態(tài)學表現(xiàn);免疫組化檢測PCNA在腎組織中的表達變化;RT-PCR和免疫組化檢測腎組織中HMGB1、TLR2、TLR4mRNA和蛋白的表達變化;RT-PCR、Werstem Blot和免疫組化檢測NF-κBmRNA和磷酸化NF-κB在腎組織中表達和轉位情況。
　　 結果:
　　 1.不同組小鼠腎功能比較
　　 與正常對照組相比,狼瘡性腎炎模型組小鼠血清中BU

5、N和Upro水平均明顯升高(P均＜0.01);而SCr水平二者相比無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 2.不同組小鼠血清中HMGB1蛋白的水平
　　 狼瘡性腎炎模型組小鼠血清中HMGB1蛋白的水平(0.57±0.03)明顯高于正常對照組(0.54±0.00)(P＜0.01)。
　　 3.不同組小鼠腎組織形態(tài)學改變
　　 與正常對照組相比,狼瘡性腎炎模型組小鼠腎組織腎小球基底膜明顯增厚、足突融合、系膜基質(zhì)

6、增多。
　　 4.PCNA蛋白在不同組小鼠腎組織中的表達
　　 與正常對照組相比,狼瘡性腎炎模型組小鼠腎組織中PCNA蛋白表達明顯升高,主要定位于腎小球細胞的細胞核。
　　 5.HMGB1mRNA及蛋白在不同組小鼠腎組織中的表達
　　 與正常對照組相比,狼瘡性腎炎模型組小鼠腎組織中HMGB1mRNA及蛋白表達均明顯升高(P均＜0.01),HMGB1蛋白主要位于腎小球細胞的胞漿和胞外;而在正常對照組小鼠腎臟

7、組織中僅腎小管上皮細胞胞核有少量表達。
　　 6.TLR2、4mRNA及蛋白在不同組小鼠腎組織中的表達
　　 與正常對照組相比,狼瘡性腎炎模型組小鼠腎組織中TLR2/4mRNA及蛋白表達均明顯升高,TLR2/4蛋白主要定位于腎小球細胞尤其是足細胞的細胞膜。
　　 7.NF-κBp65mRNA及蛋白在不同組小鼠腎組織中的表達和轉位
　　 與正常對照組相比,狼瘡性腎炎模型組小鼠腎組織中NF-κBp65mRNA

8、及磷酸化蛋白表達均明顯升高,P-NF-κBp65蛋白主要定位于腎小球細胞及腎小管上皮細胞的細胞核。
　　 8.相關性分析
　　 經(jīng)pearson相關分析,HMGB1蛋白與TLR2/4蛋白的表達水平之間呈正相關(r=0.911,P=0.012;r=0.854,P=0.000);TLR2/4蛋白與p-NF-κBp65蛋白的表達水平之間呈正相關(r=0.984,P=0.000;r=0.935,P=0.006);p-NF-κBp