人參蛋白、多肽的提取分離及性質(zhì)研究.pdf

1、目的：選擇研究較少但活性多樣的大分子－人參蛋白及多肽，通過現(xiàn)代分離純化技術(shù)、活性檢測(cè)技術(shù)及分析鑒定技術(shù)進(jìn)行生物特性研究。通過對(duì)園參、野山參及西洋參中蛋白成分進(jìn)行比較研究，為人參藥材的鑒別和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。 方法：采用不同緩沖溶液、不同料液比、不同浸提時(shí)間提取人參總蛋白，利用Bradford法測(cè)定蛋白含量，以蛋白提取率為評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選出最佳提取工藝。利用膜分離技術(shù)及柱層析技術(shù)對(duì)總蛋白進(jìn)行分離純化，結(jié)合細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)進(jìn)行

2、活性篩選。采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳法（SDS-PAGE）及凝膠電泳圖像分析軟件，對(duì)園參、野山參及西洋參中蛋白成分進(jìn)行比較研究，比較三者在蛋白分布及含量上的差異。 結(jié)果：正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明緩沖液的pH值、料液比、浸提時(shí)間對(duì)人參總蛋白的提取率均有影響。當(dāng)選用pH7的緩沖液浸提，料液比為1:15，浸提時(shí)間為18h時(shí),蛋白提取率最高，經(jīng)過中空纖維膜過濾系統(tǒng)處理，收率可達(dá)3％，純度可達(dá)80％以上。從人參總蛋白中分離純化出了分子量為50

3、27Da的人參多肽，活性實(shí)驗(yàn)表明，對(duì)Hep-2細(xì)胞具有抑制作用，對(duì)3T3細(xì)胞具有增殖作用，且活性呈現(xiàn)一定量效關(guān)系。電泳分析結(jié)果表明，園參、野山參、西洋參三者的蛋白的分子量主要分布在60.20-5.03kDa范圍內(nèi)，但在含量上卻存在很大的不同。園參中各種蛋白的含量均比較高；野山參中的蛋白含量較低，比較高的蛋白只有兩種，分子量分別為60.20kDa，16.50kDa，其它幾種蛋白的含量較園參均比較低；西洋參中蛋白分子量為60.20kDa，2

4、5.20kDa，18.20kDa三種蛋白的含量較高，其它幾種蛋白的含量較園參也均比較低。 結(jié)論：人參總蛋白的最佳提取工藝為：中性緩沖溶液浸提，料液比為1:15，浸提時(shí)間為18h。利用膜分離技術(shù)可以獲得高純度、高收率的人參總蛋白，它解決了傳統(tǒng)工藝中操作繁瑣，周期長(zhǎng)，成本高等問題，更加適合于工業(yè)化生產(chǎn)。人參多肽對(duì)3T3細(xì)胞增殖具有促進(jìn)作用，對(duì)Hep-2增殖具有抑制作用，表明其具有促進(jìn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)及抑制上皮細(xì)胞癌生長(zhǎng)作用。園參、野山