丹酚酸B對心肌缺血大鼠血管新生及對正常大鼠離體胸主動脈環(huán)張力的影響.pdf

1、目的：觀察丹酚酸B（SalvianolicacidB，簡稱SalB）體外對人臍靜脈內皮細胞(HUVECS)增值、遷移和管腔形成的影響，SalB對心肌缺血大鼠血管新生的影響及作用機制；觀察SalB的血管舒張作用并探索其作用機制。
　　 方法：1．(1)取對數期生長的人臍靜脈血管內皮細胞(HUVECS)，用MTT法觀察SalB對HUVECS活力和增殖的影響；用3H摻入法檢測SalB對HUVECSDNA合成率的影響；細胞劃痕法檢測Sa

2、lB對細胞遷移距離的影響；Transwell實驗驗證SalB對細胞劃痕遷移的作用；用體外毛細血管管腔結構實驗檢測SalB對HUVECS管腔形成的影響；(2)將HUVECS用SalB處理12h、24h、48h后，酶聯免疫吸附測定法(ELISA)測定HUVECS上清中VEGF的含量；用試劑盒測定HUVECS上清中NO和NOS的含量；將HUVECS用SalB處理24h和48h后收集細胞，WesternBlot檢測HUVECS中VEGF的表達；

3、(3)結扎大鼠冠狀動脈左降支建立大鼠心肌缺血模型，每組大鼠分別尾靜脈注射SalB1.6、3.2和6.4mg/kg，空白組，假手術組和模型組給予同等體積的生理鹽水。測定給藥后血清VEGF的含量；測定心肌組織勻漿中NO、NOS、VEGF的含量；測定缺血心肌的梗死面積；取心臟缺血區(qū)域做組織病理學檢測；通過免疫組化法測定梗死邊緣區(qū)新生血管數(MVC)。
　　 2．制備大鼠離體胸主動脈環(huán)，通過給藥觀察SalB對離體胸主動脈環(huán)的直接作用；(

4、1)觀察SalB對NE收縮血管環(huán)的影響：①先加入10-6mol/LNE收縮血管，再加入不同濃度的SalB觀察其對收縮血管的舒張能力；②用不同濃度的SalB對血管預處理15min再加入106mol/LNE收縮血管，觀察最大收縮張力；③用累積加藥法加入不同濃度的NE，記錄不同濃度NE的收縮曲線，然后沖洗血管，待穩(wěn)定后，先加入不同濃度的SalB預處理，然后累積加入不同濃度的NE，記錄其收縮曲線，觀察其收縮曲線的變化；(2)觀察SalB對KCl

5、收縮血管環(huán)的影響：①先加入60mmol/LKCl收縮血管，再加入不同濃度的SalB觀察其對收縮血管的舒張能力；②先用不同濃度的SalB對血管預處理再加入60mmol/LKCl收縮血管，觀察最大收縮張力；③用累積加藥法加入不同濃度的KCl，記錄不同濃度KCl的收縮曲線，然后沖洗血管，待穩(wěn)定后，先加入不同濃度的SalB預處理，然后累積加入不同濃度的KCl，記錄其收縮曲線，觀察其收縮曲線的變化；(3)觀察SalB對CaCl2收縮血管環(huán)的影響：

6、先通過累積加入不同濃度CaCl2得到CaCl2收縮曲線，然后用不同濃度SalB預處理后再加入不同濃度CaCl2得到CaCl2收縮曲線，觀察SalB對收縮曲線的變化；(4)觀察SalB對NE引起的依賴于細胞外鈣和內鈣的收縮反應的影響；(5)通過加入不同的抑制劑來探討SalB舒張血管環(huán)作用是否與內皮和鉀離子通道有關；(6)通過加入β受體阻斷劑來觀察SalB舒血管作用是否與β受體有關。
　　 結果：1:(1)3H摻入法，結果顯示Sal

7、B在一定濃度范圍內對HUVECS增殖作用明顯；細胞劃痕實驗和Transwell結果表明SalB對HUVECS遷移有明顯的促進作用；管腔形成實驗顯示，SalB作用HUVECS后可以使管腔形成數增多，管腔長度增長；(2)HUVECS經SalB處理后，HUVECS上清中VEGF、NO和NOS含量增加，VEGF表達上調；(3)SalB可以使心肌組織中NO、NOS和VEGF含量增加，同時血清中VEGF含量也增加；SalB能夠減少心肌梗死面積，增加

8、缺血區(qū)域和非缺血區(qū)域的血管新生。2：直接加入SalB后發(fā)現SalB對基礎狀態(tài)下胸主動脈無明顯的直接作用；SalB能明顯抑制NE的收縮，使NE的收縮曲線右移；SalB對KCl的收縮無明顯影響；SalB能使無鈣高鉀中CaCl2引起的收縮曲線明顯右移；經無鈣液處理后SalB能阻斷NE誘發(fā)的外鈣收縮和內鈣收縮；SalB舒張血管作用與內皮、鉀離子通道和β受體無關。
　　 結論：(1)SalB在體外能促進HUVECS的增值、遷移和管腔形成，