胚胎大鼠神經(jīng)干細胞體外培養(yǎng)鑒定及誘導其分化為類毛細胞的研究.pdf

1、第一部分、無血清培養(yǎng)條件下神經(jīng)干細胞的生長及分化的研究。 目的：探討體外無血清條件下培養(yǎng)胚鼠神經(jīng)干細胞(NSCs),觀察其生長及分化情況. 方法：取孕16-18天SD系大鼠的胚胎海馬組織,在含EGF,bFGF,B27的DMEM/F12培養(yǎng)基中培養(yǎng),電子顯微鏡下觀察其增殖分化過程,并通過免疫熒光方法鑒定分化后的細胞類型. 結果：NSCs在無血清培養(yǎng)基中生長旺盛,8天左右就可以形成胞體透亮、折光性好的干細胞球,分化后

2、的細胞顯示NSE,GFAP免疫陽性. 結論：無血清培養(yǎng)條件下NSCs生長良好,在含血清的培養(yǎng)基中可以分化為神經(jīng)元和星形膠質(zhì)細胞. 第二部分、神經(jīng)干細胞與體外培養(yǎng)的乳鼠基底膜上清液共培養(yǎng)分化為類毛細胞的研究。 目的: 探討體外誘導胚胎大鼠神經(jīng)干細胞(neural stem cells,NSCs)分化為類毛細胞的實驗研究。 方法: 從SD系胚鼠大腦分離NSCs,在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)后將其放到含鼠尾膠原包被的蓋

3、玻片的6孔培養(yǎng)板中培養(yǎng),然后將乳鼠基底膜取出體外培養(yǎng)后汲取其上清液與NSCs一起培養(yǎng),14-21天后通過免疫熒光和免疫組化法檢測毛細胞標志物myosin VIIa和calretinin，并計算分化比例。 結果: NSCs分化后的細胞約有15.4％呈myosin VIIa免疫熒光陽性，21.7％呈免疫組化calretinin陽性。 結論: 體外培養(yǎng)的乳鼠基底膜上清液能誘導NSCs分化為類毛細胞。 第三部分、神經(jīng)干細

4、胞與乳鼠基底膜共培養(yǎng)后分化為類毛細胞的研究。 目的: 探討體外誘導神經(jīng)干細胞(neural stem cells,NSCs)分化為類毛細胞的實驗研究。 方法: 從SD系胚鼠大腦分離NSCs,在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)。取出生3天內(nèi)乳鼠基底膜與NSCs一起培養(yǎng),14-21天后通過免疫熒光和免疫組化法檢測毛細胞標志物myosin VIIa和calretinin，并計算分化比例。 結果: NSCs分化后的細胞約有17.1％呈