毒素清顆?？箖?nèi)毒素引起小腸損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文研究目的：擬通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)揭示內(nèi)毒素介導(dǎo)小腸損傷的分子生物學(xué)機(jī)制、毒素清顆粒保護(hù)內(nèi)毒素引起小腸損傷的作用及分子生物學(xué)機(jī)制。 研究方法：健康雄性日本大耳白兔36只(n=36)，隨即分為正常組、模型組、毒素清大劑量組、毒素清中劑量組、毒素清小劑量組，雙黃連對(duì)照組。各組6只。實(shí)驗(yàn)前1天、造模前2小時(shí)及造模后30分鐘，正常組和模型組分別灌胃同等體積的生理鹽水，用藥組分別灌胃毒素清(5.04g·kg-1·d-1、2.52g·kg-1·d

2、-1、1.26g·kg-1·d-1)、雙黃連(2.8ml·kg-1·d-1)。內(nèi)毒素性小腸損傷模型采用耳緣靜脈注射精制內(nèi)毒素(60μg/Kg)。造模后5小時(shí)后取材。測(cè)定外周血中性粒細(xì)胞、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞因子TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平；測(cè)定小腸組織含水量；測(cè)定小腸內(nèi)容物中sIgA水平；采用免疫組織化學(xué)測(cè)定巨噬細(xì)胞、ICAM-1、VCAM-1和TNF；采用原位雜交技術(shù)測(cè)定MIP-2mRNA表達(dá)水平。 研究結(jié)果：

3、 1、在注射內(nèi)毒素后模型組、毒素清組、雙黃連組動(dòng)物體溫皆有升高，模型組最高。模型組△T和TRI和正常組對(duì)比(P＜0.01)，而毒素清中劑量組和模型組相比(P＜0.05，P＜0.01)。 2、在注射內(nèi)毒素后模型組、毒素清組、雙黃連組動(dòng)物呼吸加快，1小時(shí)時(shí)達(dá)到峰值，心率在1、3、5小時(shí)呈進(jìn)行增加，和正常組比較模型組在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的變化最為顯著，和模型組對(duì)比毒素清和雙黃連組在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)均能顯著逆轉(zhuǎn)呼吸和心率的變化，而毒素清和雙黃連組

4、之間無(wú)明顯差異。 3、六組動(dòng)物在造模前白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均無(wú)顯著性差異，而且空白對(duì)照組各時(shí)點(diǎn)白細(xì)胞和中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)之間無(wú)顯著性差異。模型組外周血WBC和PMN計(jì)數(shù)在60min處開(kāi)始明顯降低，與空白對(duì)照組相比差異顯著，且恢復(fù)緩慢，在實(shí)驗(yàn)5h仍低于實(shí)驗(yàn)前水平。毒素清組雙黃連組計(jì)數(shù)變化趨勢(shì)介于空白對(duì)照組和模型組，而且毒素清大、中劑量組在實(shí)驗(yàn)后5h達(dá)到略高于實(shí)驗(yàn)前的水平。 4、與對(duì)照組相比，模型組家兔小腸組織濕/干重比(P＜

5、0.05)、腸內(nèi)容物sIgA水平降低(P＜0.01)、血清中TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平(P＜0.01)顯著升高，而毒素清組各項(xiàng)指標(biāo)均較內(nèi)毒素組減輕，腸內(nèi)容物sIgA水平升高，大劑量作用更顯著。 5、正常組腸形態(tài)結(jié)構(gòu)正常，模型組可見(jiàn)腸黏膜充血水腫或腸絨毛萎縮及上皮表淺壞死，伴上皮脫落，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，以中性粒細(xì)胞為主，有些絨毛完全缺失，腸腔可見(jiàn)炎癥細(xì)胞或積液，腺體間質(zhì)見(jiàn)大量炎癥細(xì)胞。而毒素清組結(jié)構(gòu)基本正常。較模型組

6、癥狀顯著改善。 6、模型組小腸組織中TNF-α、ICAM-1、VCAM-1、巨噬細(xì)胞表達(dá)水平明顯高于空白對(duì)照組(均P＜0.01)，主要分布在固有層、腺體間質(zhì)、肌層、血管等組織的胞漿和胞膜上，經(jīng)毒素清處理后顯著降低。 7、與對(duì)照組相比，內(nèi)毒素組小腸組織中MIP-2表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.01)，主要表達(dá)在固有層、腺體間質(zhì)、肌層、血管等組織細(xì)胞漿內(nèi)，和模型組對(duì)比毒素清高劑量和中劑量組可以降低其表達(dá)(P＜0.01)。 研

7、究結(jié)論： 1、內(nèi)毒素能引起兔發(fā)熱、呼吸心率加快、等一系列全身反應(yīng)。 2、內(nèi)毒素可通過(guò)激活單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞釋放多種炎性介質(zhì)TNF-α、ICAM-1、VCAM-1、MIP-2，參與機(jī)體的免疫炎癥反應(yīng)，引起小腸損傷3、毒素清能對(duì)抗內(nèi)毒素引起的全身反應(yīng)。 4、毒素清能抑制內(nèi)毒素對(duì)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的激活作用，減少TNF-α、ICAM-1、VCAM-1、MIP-2的釋放，減輕小腸免疫炎性反應(yīng)，從而減輕小腸損傷。