早期接觸變應(yīng)原對(duì)小鼠發(fā)育后期變應(yīng)性鼻炎的影響.pdf

1、變應(yīng)性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是耳鼻喉科常見的疾病之一，全球的發(fā)病率也在不斷的升高，但其發(fā)病機(jī)制尚未被完全闡明，且治療手段也較局限，現(xiàn)有的治療體系主要由避免接觸變應(yīng)原、藥物治療和特異性變應(yīng)原免疫治療構(gòu)成，在臨床可操作性，近期和遠(yuǎn)期療效等方面又各有不足。除了特異性免疫治療，近幾年又提出了一些新的非特異性療法，如IgE單克隆抗體、基因治療、轉(zhuǎn)移因子、分枝桿菌疫苗等療法，但都處于研究階段，臨床療效尚未確定。在積極尋找變

2、應(yīng)性鼻炎的更有效的治療方法的同時(shí)，國(guó)內(nèi)外的研究也把目光放到了變應(yīng)性鼻炎的預(yù)防方面，特別是早期，即幼兒和兒童時(shí)期，并逐步研究了孕期和孕前對(duì)變應(yīng)原接觸產(chǎn)生的免疫學(xué)影響，但結(jié)論尚不統(tǒng)一，可能是受實(shí)驗(yàn)方法和變應(yīng)原的影響，且目前國(guó)內(nèi)外研究都局限于早期暴露于變應(yīng)原對(duì)體內(nèi)免疫系統(tǒng)的影響。針對(duì)變應(yīng)原早期暴露對(duì)免疫系統(tǒng)的影響，結(jié)合特異性免疫療法，我們提出假設(shè)：早期預(yù)防性接種變應(yīng)原，觀察其成年后變應(yīng)性鼻炎發(fā)生發(fā)展的情況及體內(nèi)免疫學(xué)變化，是否能產(chǎn)生保護(hù)作用，

3、為預(yù)防性治療變應(yīng)性鼻炎提供新的思路。
　　 本研究第一部分主要從方法學(xué)上對(duì)小鼠變應(yīng)性鼻炎模型進(jìn)行研究，對(duì)造模方法和脾淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清的檢測(cè)進(jìn)行初步探索。用卵清蛋白（OVA）致敏小鼠，并用OVA鹽溶液滴鼻激發(fā)制成變應(yīng)性鼻炎模型，對(duì)照組用生理鹽水替代，在末次激發(fā)后取脾單核細(xì)胞培養(yǎng)，并分別加入卵清蛋白（OVA）和刀豆蛋白（ConA）刺激脾單核細(xì)胞增殖、分泌細(xì)胞因子，分別于培養(yǎng)后24、48、72小時(shí)取培養(yǎng)上清液進(jìn)行細(xì)胞因子IL-4、IL

4、-5、IFN-γ濃度測(cè)定。另取部分脾淋巴細(xì)胞分別加入OVA和ConA培養(yǎng)72小時(shí)后測(cè)定淋巴細(xì)胞增殖率。實(shí)驗(yàn)組脾淋巴細(xì)胞受OVA和ConA刺激后顯著增殖，刺激指數(shù)SI與對(duì)照組相比有顯著差異（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)組脾單核細(xì)胞培養(yǎng)上清中加ConA刺激產(chǎn)生IL-4、IL-5和IFN-γ濃度均明顯高于對(duì)照組（P<0.05），但I(xiàn)FN-γ升高幅度明顯低于IL-4和IL-5；加OVA刺激產(chǎn)生的IL-4、IL-5比對(duì)照組明顯增高但升高幅度比加入ConA

5、的低，而IFN-γ濃度則明顯降低（P<0.05）。脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-4含量在72小時(shí)內(nèi)隨時(shí)間持續(xù)增高，IL-5及IFN-γ在48小時(shí)內(nèi)增長(zhǎng)顯著，48至72小時(shí)內(nèi)增長(zhǎng)趨緩。小鼠實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性鼻炎體內(nèi)T細(xì)胞被廣泛激活，受抗原（OVA）和非特異性刺激物（ConA）刺激Th2細(xì)胞釋放的細(xì)胞因子明顯增多，而Th1細(xì)胞及其細(xì)胞因子則受抑制；受ConA刺激產(chǎn)生細(xì)胞因子與對(duì)照組比較,差異比OVA刺激的顯著。在兩種刺激物刺激下72小時(shí)內(nèi)各細(xì)胞因子是持續(xù)

6、增多的，但不同的細(xì)胞因子在不同時(shí)間段增加的幅度不同,總的來(lái)說(shuō)72小時(shí)檢測(cè)差異最明顯。
　　 本研究的第二部分是研究小鼠早期暴露于變應(yīng)原對(duì)發(fā)育后變應(yīng)性鼻炎發(fā)生發(fā)展的影響，通過(guò)在小鼠發(fā)育的不同時(shí)期，對(duì)其皮下注射不同劑量（10μg，100μg，1000μg）的抗原（卵清蛋白，OVA），并輔以不同的免疫佐劑（氫氧化鋁，弗氏佐劑），通過(guò)血清特異性免疫球蛋白以及脾細(xì)胞培養(yǎng)上清的細(xì)胞因子水平，來(lái)觀察其成年后體內(nèi)變應(yīng)性鼻炎免疫狀態(tài)，來(lái)反映早期抗

7、原接種能否減輕其變應(yīng)性鼻炎的體內(nèi)免疫反應(yīng)，即是否對(duì)變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生有保護(hù)作用。通過(guò)對(duì)四個(gè)時(shí)期：孕前、孕期、新生、幼年的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：
　　 1.孕前皮下注射變應(yīng)原，其后代小鼠成年后經(jīng)致敏激發(fā)，誘導(dǎo)發(fā)生變應(yīng)性鼻炎，檢測(cè)其體內(nèi)抗原特異性抗體，及相關(guān)細(xì)胞因子水平，發(fā)現(xiàn)，孕前皮下注射10μgOVA并輔以不同佐劑，其后代致敏激發(fā)后體內(nèi)OVA特異性IgE水平明顯降低，與陽(yáng)性對(duì)照組有顯著差異，而OVA特異性IgG和IgG2a的水平則明顯高于

8、其他組，相應(yīng)的細(xì)胞因子IL-4的水平也是顯著降低，而IL-10和IFN-r水平則明顯升高。說(shuō)明孕前皮下注射10μgOVA對(duì)后代小鼠變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生發(fā)展有明顯的保護(hù)作用。1000μgOVA組的OVA特異性IgE水平也較陽(yáng)性對(duì)照組低，但要高于10μg劑量組，即有保護(hù)作用但不及小劑量組，而100μgOVA組后代小鼠體內(nèi)免疫學(xué)指標(biāo)則顯示微弱保護(hù)作用或無(wú)保護(hù)作用。
　　 2.孕期皮下注射變應(yīng)原，觀察后代小鼠，各劑量組之間的差異與上面孕前的

9、結(jié)果相近，也顯示10μg劑量組有明顯的保護(hù)作用，1000μg劑量組其次，100μg劑量組保護(hù)作用弱或無(wú)保護(hù)作用。但與孕前期不同的是，在孕期皮下注射大劑量變應(yīng)原（1000μg）輔以弗氏佐劑，易導(dǎo)致孕鼠流產(chǎn)、死胎、畸胎、新生鼠死亡率高的情況，因此不建議孕期給與大劑量變應(yīng)原進(jìn)行免疫接種。
　　 3.新生小鼠皮下注射變應(yīng)原，待其成年后致敏激發(fā)，發(fā)現(xiàn)100μg和1000μg劑量組的OVA特異性IgE水平明顯降低，與陽(yáng)性對(duì)照組有顯著差異，1

10、00μg劑量組的OVA特異性IgG水平明顯高于其他組，相應(yīng)細(xì)胞因子IL-4水平降低，IFN-r升高；10μg劑量組結(jié)果相反，說(shuō)明對(duì)于新生小鼠，皮下注射100或1000μg變應(yīng)原對(duì)其變應(yīng)性鼻炎的發(fā)生發(fā)展有保護(hù)作用，而小劑量則保護(hù)作用弱或無(wú)保護(hù)作用。
　　 4.幼年小鼠皮下注射變應(yīng)原，發(fā)現(xiàn)OVA-IgE和IL-4水平隨著變應(yīng)原劑量的增大而逐漸降低，而IL-10和IFN-r的水平則逐漸升高，說(shuō)明幼年注射大劑量抗原可對(duì)其產(chǎn)生保護(hù)作用，而