多沙唑嗪對硫酸吲哚酚誘導(dǎo)的單核細胞趨化蛋白-1表達影響的研究.pdf

1、目的:
　　 慢性腎臟疾病(CKD)患者同時也是動脈粥樣硬化性心血管疾病(CVD)的高危人群。大量研究證實:慢性腎臟疾病患者體內(nèi)蓄積的腎毒性物質(zhì)可誘導(dǎo)氧化應(yīng)激反應(yīng),促進動脈血管產(chǎn)生粥樣硬化病變。本研究以人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)為對象,探討a1腎上腺素受體阻滯劑--多沙唑嗪(DOX)是否影響腎毒性物質(zhì)--硫酸吲哚酚(IS)誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細胞中單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)的表達并初步探討其作用機制。
　　 方法:

2、
　　 培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞,將其分成空白對照組、硫酸吲哚酚組、硫酸吲哚酚與多沙唑嗪聯(lián)合組(簡稱聯(lián)合組)和多沙唑嗪組。采用DHE染色法觀察細胞內(nèi)活性氧自由基(ROS)產(chǎn)物的變化；應(yīng)用Western-Blotting實驗檢測細胞的磷酸化ERK1/2、磷酸化p38MAPK和NF-rκBp65蛋白表達；采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法檢測細胞的培養(yǎng)上清中MCP-1蛋白分泌情況；應(yīng)用RT-PCR分別測定MCP-1的mRNA和a1腎上

3、腺素受體D、B、A的mRNA的表達。
　　 結(jié)果:
　　 (1)硫酸吲哚酚組活性氧自由基產(chǎn)物比對照組明顯增加,聯(lián)合組和多沙唑嗪組的活性氧自由基產(chǎn)物比硫酸吲哚酚組明顯減少。硫酸吲哚酚呈時間依賴性誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細胞中活性氧自由基產(chǎn)物增加,而多沙唑嗪顯著抑制硫酸吲哚酚誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞內(nèi)活性氧自由基的產(chǎn)生。
　　 (2)硫酸吲哚酚呈時間依賴性誘導(dǎo)HUVEC中ERK1/2MAPK的磷酸化。聯(lián)合組細胞在硫酸吲哚酚誘導(dǎo)

4、2分鐘、5分鐘、10分鐘、20分鐘、30分鐘、60分鐘、120分鐘后測得的磷酸化ERK1/2MAPK的量與硫酸吲哚酚組比較分別減少10.53％、59.44％、42.13％、31.49％、25.67％、19.75％、18.08％(P<0.05)；其中以5分鐘時變化最顯著。硫酸吲哚酚組與對照組、硫酸吲哚酚組與聯(lián)合組、硫酸吲哚酚組與多沙唑嗪組相比,ERK1/2MAPK蛋白定量差值具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (3)聯(lián)合組和多

5、沙唑嗪組磷酸化p38MAPK的表達與硫酸吲哚酚組比較無明顯改變。
　　 (4)硫酸吲哚酚組的NF-κBp65較對照組增加94.84％(P<0.05),而聯(lián)合組的NF-κBp65比硫酸吲哚酚組減少20.68％(P<0.05)。硫酸吲哚酚組與對照組、硫酸吲哚酚組與聯(lián)合組、硫酸吲哚酚組與多沙唑嗪組比較,NF-κBp65蛋白定量差值具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (5)硫酸吲哚酚組MCP-1的mRNA表達與對照組相比呈時

6、間依賴性顯著增加,在硫酸吲哚酚誘導(dǎo)1小時后硫酸吲哚酚組MCP-1的mRNA表達比對照組增加56.17％(P<0.05),而與硫酸吲哚酚組相比,聯(lián)合組MCP-1的mRNA表達減少30.37％(P<0.05)。硫酸吲哚酚組與對照組、硫酸吲哚酚組與聯(lián)合組、硫酸吲哚酚組與多沙唑嗪組間差值具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (6)與硫酸吲哚酚組相比較,聯(lián)合組的MCP-1蛋白濃度在1小時、3小時、6小時、16小時、24小時、48小時分別

7、下降21.07％、41.11％、49.62％、56.02％、38.44％、17.29％,其中以16小時時下降最顯著,兩組間的差值具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 (7)在mRNA水平證實人臍靜脈內(nèi)皮細胞內(nèi)存在a1腎上腺素受體D和A,未發(fā)現(xiàn)a1腎上腺素受體B。
　　 結(jié)論:
　　 (1)多沙唑嗪抑制人臍靜脈內(nèi)皮細胞內(nèi)NADPH氧化酶來源的ROS產(chǎn)物生成,進而通過抑制ERK1/2MAPK及NF-κBp65途徑的