益骨湯含藥血清對骨細胞因子OPG、RANKLmRNA表達的影響.pdf

1、目的：研究中藥復方益骨湯含藥血清對體外培養(yǎng)大鼠成骨細胞骨細胞因子OPG、RANKLmRNA的基因表達，以探討中藥復方防治骨質(zhì)疏松癥的作用機理。
　　方法：1.采用胰酶-膠原酶消化法從新生SD小鼠顱骨獲取成骨細胞，進行原代、傳代培養(yǎng)。取第二代細胞作為實驗模型。同時制備各種含藥血清。
　　2.將不同濃度的益骨湯含藥血清以及含福善美陽性對照組血清和空白對照組血清與分離培養(yǎng)制得的新生大鼠顱骨第二代成骨細胞共同培養(yǎng)。
　　3.細

2、胞形態(tài)學觀察：每日通過相差顯微鏡觀察細胞的形態(tài)、生長狀況及對照組和中藥血清處理組之間的差別。
　　4.提取成骨細胞總 RNA。（使用Trizol兩步法）。
　　5.mRNA表達的定量：用β-actin作為內(nèi)參照，RT-PCR測定各組成骨細胞 OPG和RANKL的相對表達量，并計算各組OPG/RANKL的比值。
　　結果：細胞形態(tài)學觀察，益骨湯含藥血清高中低各組、福善美陽性對照組與生理鹽水空白對照組比較，細胞數(shù)量較密集，

3、細胞間隙小，形態(tài)無明顯差異。RT-PCR結果顯示：在OPG mRNA的表達方面，高、中、低劑量組、福善美陽性對照組分別與生理鹽水空白對照組比較均有顯著性差異（P值分別為P<0.01，P<0.05，P<0.05，P<0.01）；高、中、低劑量組與福善美組比較均無顯著性差異（P＞0.05）；高、中、低三組組間比較，均有顯著性差異（P<0.05）。在RANKL mRNA的表達方面，高、中、低劑量組、福善美組分別與生理鹽水組比較均有顯著性差異（

4、P值分別為P<0.01，P<0.05，P<0.05，P<0.01）；高、中、低劑量組與福善美組比較均無顯著性差異（P＞0.05）；高、中、低三組組間比較，均有顯著性差異（P<0.05）。在OPG/RANKL比值改變方面，高、中、低劑量組、福善美組分別與生理鹽水組比較均有顯著性差異（P值分別為P<0.01，P<0.05，P<0.05，P<0.01）；高、中、低劑量組與福善美組比較均無顯著性差異（P＞0.05）；高、中、低三組組間比較，均有