非小細胞肺癌經(jīng)典HLA-Ⅰ抗原下調與淋巴結轉移的相關性及其調控機制.pdf

1、目的：探討非小細胞肺癌(Non-small cel lung cancer，NSCLC)原發(fā)灶、淋巴結癌轉移灶經(jīng)典HLA-I類抗原的表達及其相關性，并對抗原加工機器組分TAP1、LMP2 mRNA缺陷及原癌基因K-ras點突變、C-erbB-2擴增對NSCLC經(jīng)典HLA-I類抗原表達的調控作用進行初步探索。 方法：(1)應用流式細胞術檢測65例NSCLC原發(fā)灶及31例淋巴結轉移灶經(jīng)典HLA-I類抗原的表達(正常肺組織及淋巴結組織

2、作對照)。(2)應用RT-PCR．技術檢測31例非小細胞肺癌原發(fā)灶、3例淋巴結轉移灶(根據(jù)流式細胞術檢測其經(jīng)典HLA-I類抗原呈陰性表達或低表達)’lAPlmRNA、LMP2 mRNA的表達(經(jīng)典HLA-I類抗原呈陽性表達的肺癌原發(fā)灶及正常肺組織、淋巴結組織作對照)。(3)應用差別PCR技術、PCR-RFLP技術檢測65例肺癌原發(fā)灶、31例淋巴結轉移灶(根據(jù)流式細胞術檢測其經(jīng)典HLA-I類抗原呈陰性表達或低表達)C-erbB-2擴增及K

3、-ras基因第12位密碼子點突變(正常肺組織及淋巴結組織作對照)。并根據(jù)不同的變量類型及目的，分別采用t檢驗，Spearman相關分析，卡方檢驗，Logistic回歸分析及Fisher's精確概率法進行統(tǒng)計學分析。 結果：(1)65例肺癌原發(fā)灶中有58例(89.2﹪)表現(xiàn)為經(jīng)典HLA-I類抗原表達下調(陰性表達和低表達)。存在淋巴結轉移的肺癌原發(fā)灶其經(jīng)典HLA-I類抗原的平均表達率(31.89±9.56﹪)低于無淋巴結轉移肺癌原

4、發(fā)灶的經(jīng)典HLA-I類抗原的平均表達率(42.46±10.38﹪)，但差異無統(tǒng)計學意義(t=1.57，P>0.05)。淋巴結轉移灶經(jīng)典HLA-I類抗原的表達率(15.35±6.24﹪)明顯低于肺癌原發(fā)灶(39.68±12.46﹪)(t=2.06，P<0.05)，且與肺癌原發(fā)灶經(jīng)典HLA-I類抗原表達下調明顯呈正相關(r<,s>=0.487．P<0.01)。 (2)經(jīng)典HLA-I類抗原表達下調(陰性表達和低表達)的肺癌原發(fā)灶中，TAP1

5、mRNA表達率為41.9﹪(13/31)，經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陽性表達的肺癌原發(fā)灶TAP1 mRNA表達率為88.9﹪(8/9)，二者相比，有統(tǒng)計學差別(P=0.014)。經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達下調的肺癌原發(fā)灶LMP2 mRNA表達率為38.7﹪(12/31)，經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陽性表達的肺癌原發(fā)灶LMP2 mRNA表達率為77.8﹪(7/9)，二者相比，有統(tǒng)計學差別(P=0.039)。經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達下調的淋巴結癌轉移灶中

6、TAP1 mRNA表達率為16.1﹪(5/31)，明顯低于肺癌原發(fā)灶(x2=5.01，P<0.05)；LMP2 mRNA表達率為12.9﹪(4/31)，也同樣低于肺癌原發(fā)灶(x2=5.39，P<0.05)。(3)肺癌原發(fā)灶K-ras基因突變率為23.1﹪(15/65)，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達下調的肺癌原發(fā)灶中表達，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達呈陽性的肺癌原發(fā)灶中不表達，其在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原呈陰性表達的肺癌原發(fā)灶中的表達率為54.5

7、﹪(6/11)，在呈低表達的肺癌原發(fā)灶中的表達率為20﹪(9/45)，存在明顯差異(x<'2>=5.38，P<0.05)。在31例淋巴結轉移灶中，K-ras基因突變率為41.9﹪(13/31)，比肺癌原發(fā)灶高，但差別無統(tǒng)計學意義(x<'2>=3.56，P>0.05)。(4)肺癌原發(fā)灶C-erbB-2擴增率為32.3﹪(21/65)，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達、低表達、陽性表達的肺癌原發(fā)灶中均有表達，其中在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達

8、與陽性表達的肺癌原發(fā)灶中，C-erbB-2擴增率存在差異(p=0.02)。淋巴結轉移灶中亦表現(xiàn)出C-erbB-2擴增，擴增率為48.4﹪(15/31)，高于肺癌原發(fā)灶，但統(tǒng)計學分析無差別(x<'2>=2.32，P>0.05)。經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達與低表達淋巴結癌轉移組，C-erbB-2擴增率比較無統(tǒng)計學差異(P=0.18)。結論：(1)流式細胞術可有效檢測NSCLC癌組織經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原的表達；存在淋巴結轉移的肺癌原發(fā)灶與無

9、淋巴結轉移的肺癌原發(fā)灶相比，其經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達無差異；淋巴結轉移灶經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原的表達率明顯低于肺癌原發(fā)灶，二者明顯呈正相關，表明原發(fā)灶中存在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達下調的腫瘤細胞更具轉移潛能，經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達下調是肺癌淋巴結轉移的機制之一。 (2)TAP1、LMP2 mRNA的表達缺陷是NSCLC原發(fā)灶及淋巴結轉移灶經(jīng)典HLA-Ⅰ抗原表達下調的機制之一，在淋巴結癌轉移灶表現(xiàn)更明顯。(3)癌基因K-ras突變和C-

10、erbB-2擴增與NSCLC原發(fā)灶及淋巴結轉移灶經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達呈負相關。 方法：應用流式細胞術檢測65例NSCLC原發(fā)灶及31例淋巴結轉移灶經(jīng)典HLA-I類抗原的表達(正常肺組織及淋巴結組織作對照)，t檢驗比較二者經(jīng)典HLA-I類抗原表達的差別， Spearman相關分析比較二者經(jīng)典HLA-I類抗原表達的相關性，Logistic多因素回歸分析判定經(jīng)典HLA-I類抗原表達下調與肺癌淋巴結轉移的關系。 結果：65例

11、肺癌原發(fā)灶中有58例(89.2﹪)表現(xiàn)為經(jīng)典HLA-I類抗原表達下調。存在淋巴結轉移的肺癌原發(fā)灶經(jīng)典HLA-I類抗原的平均表達率(31.89±9.56﹪)低于無淋巴結轉移的肺癌原發(fā)灶(42.46±10.38﹪)，但差異無統(tǒng)計學意義(t=1.57，P>0.05)。淋巴結癌轉移灶經(jīng)典HLA-I類抗原的表達率(15.35±6.24﹪)明顯低于肺癌原發(fā)灶(39.68±12.46﹪)(t=2.06，P<0.05)，且與肺癌原發(fā)灶經(jīng)典HLA-I類抗

12、原表達下調明顯呈正相關(r<,s>=0.487．P<0.01)。Logistic回歸分析顯示，經(jīng)典HLA-I類抗原陰性表達(OR=2.570，P=0.036)是肺癌淋巴結轉移的危險因素。 方法：分別應用差別PCR技術、PCR-RFLP技術檢測65例肺癌組織、31例淋巴結轉移灶(根據(jù)流式細胞術檢測其經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原呈陰性表達或低表達)C-erbB-2擴增及K-ras基因第12位密碼子點突變(正常肺組織及淋巴結組織作對照)，應用

13、卡方及Fisher′s精確概率法進行統(tǒng)計學分析。 結果：(1)肺癌原發(fā)灶K-ras基因突變率為23.1﹪(15/65)，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達下調的肺癌原發(fā)灶中表達，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原表達呈陽性的肺癌原發(fā)灶中不表達，其在呈陰性表達的肺癌原發(fā)灶中的表達率為54.5﹪(6/11)，在呈低表達的肺癌原發(fā)灶中的表達率為20﹪(9/45)，存在明顯差異(x<'2>=5.38，P<0.05)。在31例淋巴結轉移灶中，K-ras基因突

14、變率為41.9﹪(13/31)，比肺癌原發(fā)灶高，但差別無統(tǒng)計學意義(x<'2>=3.56，P>0.05)。淋巴結轉移灶經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達組，K-ras基因突變率為50﹪(11/22)，高于低表達組22.2﹪(2/9)，但統(tǒng)計學差別不明顯(P=0.12)。(2)肺癌原發(fā)灶C-erbB-2擴增率為32.3﹪(21/65)，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達、低表達、陽性表達的肺癌原發(fā)灶中均有表達，其中在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達與陽

15、性表達的肺癌原發(fā)灶中，C-erbB-2擴增率存在差異(p=0.02)。淋巴結轉移灶中亦表現(xiàn)出C-erbB-2擴增，擴增率為48.4﹪(15/31)，高于肺癌原發(fā)灶，但統(tǒng)計學分析無差別(x<'2>=2.32，P>0.05)。經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達與低表達淋巴結癌轉移組，C-erbB-2擴增率比較無統(tǒng)計學差異(P=0.18)。(3)K-ras基因突變和C-erbB-2擴增共表達在65例肺癌原發(fā)灶中共檢測到12例，占18.5﹪(12/6

16、5)，在經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達組共表達率為45.5﹪(5/11)，高于經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原低表達組的15.6﹪(7/45)，有統(tǒng)計學差異(x<'2>=4.69，P<0.05)。淋巴結轉移灶中二者共表達占29﹪(9/31)，高于肺癌原發(fā)灶，但統(tǒng)計分析無明顯差別(x<'2>=1.37，P>0.05)。二者共表達在淋巴結轉移灶經(jīng)典HLA-Ⅰ類抗原陰性表達組與低表達組分別為36.4﹪(8/22)、11﹪(1/9)，經(jīng)典HLA-I類抗原陰性