組織芯片研究血管生成因子在肝細胞癌中的表達及其與預后的關系.pdf

1、組織芯片的概念是1998年由Kononen等首次提出，即將數(shù)十個、數(shù)百個乃至上千個小的組織片按預先設計的需要整齊地排放在某一載體上(通常是載玻片)而成的矩陣微縮組織切片。它可以克服傳統(tǒng)病理技術只能逐個組織切片進行研究的方式，從而成百、成千倍地提高效率，一次檢測即可獲取大量的生物學信息，且可以很好地代表其供體組織的組織特點，大大減少研究時間和經(jīng)費耗費。同時，組織芯片技術可以與DNA、RNA、蛋白質(zhì)、抗體等技術相結(jié)合，在基因、基因轉(zhuǎn)錄和相關

2、表達產(chǎn)物生物學功能三個水平上進行研究。這對人類基因組學的研究與發(fā)展，尤其對基因和蛋白質(zhì)與疾病關系的研究、疾病相關基因的驗證、疾病的分子診斷、治療過程的追蹤和預后等方面具有實際意義和廣闊的市場前景。 原發(fā)性肝癌是一種常見的惡性腫瘤，其死亡率占全球惡性腫瘤死亡率的第三位，為我國惡性腫瘤死亡率的第二位，而肝細胞肝癌(HCC，以下簡稱肝癌)占我國原發(fā)性肝癌中的80％以上。盡管肝癌的預防、早期診斷及治療等均取得了可喜的進步，但肝癌人群的總

3、體預后仍無顯著提高，5年生存率只有5％左右，肝內(nèi)播散轉(zhuǎn)移及復發(fā)是阻礙病人術后長期生存的最嚴重問題。 肝癌的復發(fā)轉(zhuǎn)移是一個多步驟、多環(huán)節(jié)的過程。Folkman等1971年提出了腫瘤生長依賴新生血管的概念。而肝癌是富血管實體瘤，不管是肝內(nèi)復發(fā)還是肝外轉(zhuǎn)移，直接或間接參與血管生成的因素在肝癌的術后轉(zhuǎn)移復發(fā)中起非常重要的作用。當前，腫瘤血管生成的評估包括腫瘤微血管密度(MVD)和血管生成因子檢測兩個方面。血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)

4、、血小板衍化內(nèi)皮細胞生長因子(PD-ECGF)等是重要的血管生成因子，與腫瘤的MVD和預后相關。 復發(fā)的預防措施主要是抑制、消滅殘癌，防止腫瘤再發(fā)。目前對于術后復發(fā)率高這樣一個現(xiàn)象的對策是：術后給予預防性化療栓塞或干擾素的大劑量治療等方法。但是目前更合理的方案是選擇性地對復發(fā)高?；颊邔嵤╊A防性治療，減輕患者的痛苦和經(jīng)濟負擔。因此臨床迫切需要能夠準確預測病人預后的指標。 本課題擬應用組織芯片技術來制備肝癌組織芯片，并將其應

5、用于研究MVD和血管生成因子VEGF和PD-ECGF在肝癌中的表達及其與預后的關系。 方法： 1．肝細胞癌組織芯片的制作 隨機選取1997年1月～2000年12月間在中山醫(yī)院肝癌研究所第一次行肝癌切除術，并經(jīng)組織病理學檢查證實為肝細胞肝癌的400例病人的組織標本石蠟塊，應用組織芯片技術分別制作成5組各100例中密度肝癌組織芯片：A組一AFP(甲胎蛋白)陰性未復發(fā)組芯片；B組一AFP陰性復發(fā)組芯片；C組一AFP陽性

6、未復發(fā)組芯片；D組一AFP陽性復發(fā)組芯片以及E組一相應的癌旁對照組芯片。芯片上各組織點直徑均為lmm，組織芯片位點排列整齊，較少移位和脫點。 2．血管生成因子在肝細胞癌中的表達及其與預后的關系 應用免疫組織化學染色方法研究肝癌組織芯片中MVD計數(shù)及VEGF和PD-ECGF的表達情況。單因素方差分析比較組間MVD差異，Log-rank法比較不同VEGF和PD-ECGF表達組間5年生存率(以下簡稱生存率)和5年無瘤生存率(以

7、下簡稱無瘤生存率)的差別?？ǚ綑z驗(Fisher精確檢驗法)比較各組間5年累積復發(fā)率(以下簡稱復發(fā)率)和5年累積死亡率(以下簡稱死亡率)之間的差別；聯(lián)合檢測VEGF和PD-ECGF以評定其對預后的預測作用。COX比例風險模型進行多因素分析以了解各個相關因素對生存率和無瘤生存率的影響。 結(jié)論： (1)組織芯片具有高通量、高效、快速的特點，其組織位點基本可以代表傳統(tǒng)病理切片上的組織病理特征，即從組織芯片得到的研究結(jié)果能夠代表

8、原組織的所有信息。 (2)腫瘤MVD計數(shù)與肝癌切除術后復發(fā)率呈正相關。 (3)腫瘤PD-ECGF表達陽性提示肝癌術后復發(fā)率和死亡率增高，生存率和無瘤生存率均顯著降低。 (4)腫瘤VEGF表達陽性提示術后高復發(fā)可能，無瘤生存率顯著降低，但與生存率和死亡率無相關性。 (5)腫瘤VEGF和PD-ECGF同時表達陽性病例的復發(fā)率顯著高于非同時陽性病例，其無瘤生存率顯著降低，而在生存率和死亡率方面則無顯著差異。