ATM對AT細胞輻射敏感性的影響及其作用機理的研究.pdf

1、目的：探討輻射介導(dǎo)的GM、ATM+．AT、AT細胞DNA損傷與修復(fù)；闡明毛細血管擴張性共濟失調(diào)突變基因(Ataxiatel觚giectasiamutated，ATM)介導(dǎo)的乳癌基因1(breastcancergene1，Brcal)磷酸化及其下游DNA修復(fù)相關(guān)蛋白(DNAdamagerepairprotein51，RAD51)在脫氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid，DNA)損傷修復(fù)信號傳導(dǎo)通路中作用機理；探討60Coγ

2、射線照射前、后，BRCAl、RAD51蛋白在GM、ATM+．AT、AT細胞中的表達。 方法：(1)不同輻射劑量Y射線照射GM細胞、ATM+．AT細胞和AT細胞細胞；加入P13K抑制劑womnannin(WT)與對照組加入DMSO，應(yīng)用堿性彗星試驗(alkalinecometassay)，也稱堿性單細胞凝膠電泳法，測定彗星率和彗星尾長。(2)將60Coγ輻照后的AT細胞通過免疫共沉淀及WestemBlot法分析其中ATM和BRCA

3、1蛋白以及BRCAl和RAD51蛋白之間的相互作用。(3)應(yīng)用免疫熒光染色和激光掃描共聚焦顯微鏡，觀察GM、ATM+．AT、AT細胞在照射O和10Gy叫C0丫射線后，BRCAl、RAD51蛋白在上述細胞中的定位及表達并進行定量分析。 結(jié)果：(1)三種細胞隨著輻射劑量的增大，彗星尾長逐漸增加，各個劑量組之間比較有顯著差異(P＜0.001)；細胞之間比較：三種細胞尾長按GM細胞、ATM+．AT細胞、AT細胞的順序逐漸增加，各個細胞組

4、之間比較有差異(P<0．05)；加入WT后細胞修復(fù)受到抑制，與對照組加入DMS0的尾長比較有差異(P<0．05)，且各個細胞之間比較按GM細胞、ATM+．AT細胞、AT細胞的順序尾長逐漸增加，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)。(2)GM細胞、ATM+．AT細胞BRCAl和RAD51蛋白均有表達，而AT細胞無表達。(3)未經(jīng)∞COY射線照射時，BRCAl、RAD51蛋白在GM、ATM+．AT、AT細胞中僅有少量表達并且無共定位表達，其中在AT

5、細胞中表達量最低；照射lOGy60Coγ射線后，BRCAl、RAD51在GM、ATM+．AT、AT細胞中表達量增高，其中GM、ATM+．AT細胞呈現(xiàn)共定位表達，AT細胞無共定位表達；GM、ATM+．AT細胞中BRCAl、RAD51蛋白表達量與AT細胞比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P

6、大細胞損傷越明顯：而AT細胞對輻射的敏感性最強；WT對細胞損傷后的修復(fù)有抑制作用。(2)BRCAl由ATM介導(dǎo)磷酸化后可進一步與RAD51相互作用，這是信號通路傳導(dǎo)過程中的一個級聯(lián)反映，從而修復(fù)損傷的DNA，保持基因組的穩(wěn)定性。(3)GM細胞和ATM+．AT細胞中存在ATM基因，ATM在射線等因素誘導(dǎo)下可以激活其下游基因BRCAl、RAD51，并且使這兩種蛋白表達或表達量增加并且相互作用，共同完成輻射損傷后的細胞修復(fù)；外源性ATM轉(zhuǎn)入正